- Обеспечение биобезопасности при проведении лабораторных диагностических исследований
- Биологический материал со слизистых оболочек верхних дыхательных путей
- Вирус гриппа а/b, качественное определение рнк (influenza virus a/b, quality, rna) — узнать цены на анализ и сдать в москве
- Когда делают пцр анализ на грипп и орви?
- От-пцр – метод обратной транскрипции — полимеразной цепной реакции
- Правила подготовки к анализу
- Расшифровка анализа
- Памятка по забору клинического материала для исследования на грипп и орви
Обеспечение биобезопасности при проведении лабораторных диагностических исследований
7.1 Первичное (скрининговое) исследование материала от больного, подозрительного на заражённость вирусом ВГА, проводят в вирусологических лабораториях на базе вирусологических лабораторий ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъектах Российской Федерации или лабораторий учреждений противочумной системы Роспотребнадзора (в соответствии с перечнем – приложение 3), имеющих разрешение на работу с ПБА III — IV группы патогенности.
Все манипуляции по забору образцов от больных обученный медицинский персонал осуществляет в средствах индивидуальной защиты органов дыхания (респиратор типа ШБ-1 или РБ «Лепесток-200»), защитными очками или щитком для защиты лица, резиновыми перчатками в боксе биологической безопасности II класса.
Подтверждающее тестирование осуществляется в референс-лаборатории (приложение 1).
7.2 Проведение работ по проведению вирусологических исследований должны выполняться в лабораториях с уровнем безопасности BSL3: заражение культур клеток или куриных эмбрионов, а также связанных с возможностью образования аэрозоля осуществляют в боксах безопасности III класса.
Работы проводят в изолирующем костюме «Кварц».
7.3 Аптечка экстренной профилактики лабораторий, проводящих диагностику заболеваний, вызванных ВГА, должна быть укомплектована в соответствии с СП 1.3.1285-03 и дополнена препаратами группы азельтамивира («Тамифлю» или аналоги).
7.
4 Режимы обеззараживания различных объектов при лабораторной диагностике ВГА (в соответствии с СП 1.3.1285-03).
7.4.1 Обеззараживание поверхностей помещения (пол, стены, двери), оборудования, рабочих столов и др. – двукратным протиранием с интервалом 15 мин 6% раствором перекиси водорода или 3% раствором хлорамина (экспозиция 120 мин), либо любым дезинфицирующим средством, обладающим вирулицидной активностью, с последующей обработкой УФ в течение 60 мин.
Запрещено одновременное использование 6% раствора перекиси водорода и 3% раствора хлорамина в пределах одной лаборатории в связи с опасностью взрывоподобного характера протекания химической реакции при смешении этих растворов.7.4.
2 Обеззараживание защитной одежды осуществляют:
а) кипячением в 2% растворе соды в течение 30 мин с момента закипания;
б) замачиванием на 30 мин при 50°С в 3% растворе перекиси водорода с 0,5% моющего средства.
7.4.3 Обеззараживание перчаток – замачиванием на 60 мин в 6% растворе перекиси водорода с 0,5% моющего средства или в 3% растворе хлорамина.
7.4.
4 Обеззараживание лабораторной посуды, автоклавируемых дозаторов, наконечников, вируссодержащих жидкостей, агарозного геля, инструментария из металла проводится методом автоклавирования – давление 2,0 кГс/см2 (0,2 Мпа), температура 132±2°С, время 45 мин.
7.4.
Биологический материал со слизистых оболочек верхних дыхательных путей
Сбор материала для культуральных исследований и микроскопии необходимо проводить до назначения специфической противомикробной терапии. Несоблюдение данного условия может привести к ложноотрицательному результату исследования. материал берут натощак или через 3-4 ч после еды. Для более полного открытия глоточного отверстия рекомендуется по время забора материала надавливать шпателем на корень языка. Важно, чтобы при извлечении тампона он не касался зубов, щек, языка. Для сбора мазков из носоглотки и ротоглотки используются стерильные зонды, которые после сбора материала погружают в контейнеры с транспортной средой, обеспечивающей стабильность и сохранение ростовых свойств микроорганизмов. Тип зондов, состав транспортных сред, методику сбора, а также условия хранения и транспортирования клинического материала следует уточнить в инструкции к используемым реагентам.
Хранение образцов
- Для культуральных исследований и микроскопии – при температуре 2–8°С не более 24 ч.
- Для выявления РНК/ДНК:
- при температуре 2–8°С – в течение 3 сут.;
- при температуре минус 16–20°С – до 3 мес.;
- длительно при температуре не выше минус 68°С.
Допускается лишь однократное замораживание–оттаивание материала.
Мазки со слизистой носоглотки и ротоглотки для выявления РНК/ДНК – рекомендуется совмещать мазки со слизистой носоглотки и ротоглотки в одной пробирке. Для этого сначала берут мазки разными зондами со слизистой нижнего носового хода, а затем из ротоглотки, при этом рабочие концы зондов после взятия мазков у пациента помещаются в одну пробирку с 500 мкл транспортной среды для хранения и транспортировки респираторных мазков, и исследуются как один образец. Материал берется после полоскания полости ротоглотки кипяченой водой комнатной температуры. Если полость носа заполнена слизью, перед процедурой рекомендуется провести высмаркивание. В течение шести часов перед процедурой нельзя использовать медикаменты, орошающие носоглотку или ротоглотку и препараты для рассасывания во рту. Мазки со слизистой носоглотки берут сухим стерильным назофарингеальным велюр-тампоном на пластиковом аппликаторе. Зонд вводят легким движением по наружной стенке носа на глубину 2–3 см до нижней раковины, слегка опускают книзу, вводят в нижний носовой ход под нижнюю носовую раковину до носоглотки, делают вращательное движение и удаляют вдоль наружной стенки носа. Общая глубина введения зонда должна составлять примерно половину расстояния от ноздри до ушного отверстия (3–4 см для детей и 5–6 см для взрослых). После забора материала конец зонда с тампоном опускают в стерильную одноразовую пробирку с 500 мкл транспортной среды для хранения и транспортировки респираторных мазков до места слома, при этом гибкая часть зонда сворачивается спиралью, далее, прикрывая сверху пробирку крышкой, рукоятку зонда опускают вниз, добиваясь полного отламывания верхней части зонда. Пробирку герметично закрывают. Мазки из ротоглотки берут сухими стерильными зондами из полистирола с вискозными тампонами вращательными движениями с поверхности миндалин, небных дужек и задней стенки ротоглотки, аккуратно прижимая язык пациента шпателем. После забора материала рабочую часть зонда с тампоном помещают в стерильную одноразовую пробирку с 500 мкл транспортной среды и зондом с мазком из носоглотки. Конец зонда с тампоном отламывают, придерживая крышкой пробирки с расчетом, чтобы он позволил плотно закрыть пробирку.
Смыв из ротоглотки для диагностики эпидемического паротита (выделение РНК). Перед взятием смывов из ротоглотки проводят предварительное полоскание полости рта водой. После этого проводят тщательное полоскание ротоглотки (в течение 10-15 с) 25-40 мл изотонического раствора натрия хлорида. Жидкость собирают через стерильную воронку в стерильный флакон на 50 мл.
Хранение образцов
- при комнатной температуре – в течение 6 ч.
- при температуре от 2°С до 8°С – в течение 3 суток
- при температуре минус 20°С – в течение 1 недели
- при температуре минус 70°С – длительно
Мазки из ротоглотки и носа для диагностики дифтерии, пневмококковой, стафилококковой, стрептококковой инфекции (культуральные исследования) – для взятия материала используется сухой стерильный ватный тампон, вмонтированный в пробку пробирки или готовые транспортные среды, отдельным тампоном из ротоглотки и из носа. Взятие мазков осуществляют натощак или не ранее двух часов после еды, не касаясь тампоном языка, внутренних поверхностей щек и зубов.
Мазки из ротоглотки и носа для диагностики менингококковой инфекции (культуральные исследования) – тампон вводят через ротовую полость ватным концом кверху за мягкое небо в носоглотку и проводят 2–3 раза по задней стенке. При извлечении из ротоглотки тампон не должен касаться окружающих тканей (зубы, слизистая щек, язык, небный язычок). После извлечения тампона содержащуюся на нем слизь засевают на чашки (сывороточный агар и сывороточный агар с линкомицином) или помещают в транспортную среду для немедленной доставки в лабораторию. Допускается применение коммерческих питательных транспортных сред разрешенных к применению в Российской Федерации в установленном порядке.
Мазки из носоглотки для диагностики гриппа (культуральные исследования) собирают стерильными зондами с вискозными тампонами из нижнего носового хода. Зонд с тампоном вводят легким движением по наружной стенке носа на глубину 2–3 см до нижней раковины, слегка опускают книзу, вводят в нижний носовой ход глубоко, делают вращательное движение и удаляют вдоль наружной стенки носа. Общая глубина введения зонда должна составлять примерно половину расстояния от ноздри до ушного отверстия (3–4 см для детей и 5–6 см для взрослых). После взятия материала тампон, не нарушая стерильности, помещают в пробирку с 2,0–5,0 мл вирусологической транспортной среды. Материал хранят в течение 24 ч при температуре 2–8°С, более длительно – при температуре не выше минус 16°С.
Мазки из носоглотки для диагностики коклюша (культуральные исследования) собирают стерильными зонд-тампонами с вискозным наконечником на алюминиевой основе, вмонтированный в пробку и пробирку с транспортной средой AMIES с активированным углем. Зонд извлекают из упаковки, вводят через носовые ходы и удерживают в носоглотке в течение 10 сек, чтобы он пропитался отделяемым слизистой носоглотки. После этого тампон извлекают, делая упор на боковую стенку носа, и немедленно помещают в пробирку с транспортной средой AMIES с активированным углем. Собранный материал необходимо исследовать в день получения (в исключительных случаях – хранить в холодильнике при температуре 2–8°С не более 12 ч).
Заднеглоточные мазки для диагностики коклюша (культуральные исследования) собирают стерильным зонд-тампоном с вискозным наконечником на алюминиевой основе, вмонтированным в пробку, вносят в пробирку с транспортной средой AMIES с активированным углем. Целесообразно использовать готовые комплекты. Зонд извлекают из упаковки, пробирку со средой вскрывают, конец зонда (на расстоянии 2 см от конца с тампоном) помещают в пробирку и изгибают под углом 135°, делая упор на внутренний край пробирки, и извлекают из пробирки. Аккуратно прижимая язык пациента шпателем, вводят изогнутый тампон в ротовую полость ниже язычка и собирают материал с задней стенки глотки, не задевая язык, слизистую оболочку щек и миндалины. Зонд с биоматериалом помещают в пробирку со средой AMIES, следя за тем, чтобы пробка, в которую вмонтирован тампон, плотно закрывала пробирку. Пробирки с транспортной средой AMIES до использования хранят при комнатной температуре. После взятия материала тампон, не нарушая стерильности, помещают в пробирку с 2,0–5,0 мл вирусологической транспортной среды. Собранный материал необходимо исследовать в день получения (в исключительных случаях – хранить в холодильнике при температуре 2–8°С не более 12 ч).
Метод «кашлевых пластинок» для диагностики коклюша (культуральные исследования): чашку со средой (Борде-Жангу или КУА с антибиотиками и добавлением 20% или 10% крови животных соответственно), хранящуюся при температуре 2–8°С, выдерживают при комнатной температуре, подносят на расстоянии 8–10 см ко рту кашляющего ребенка и удерживают ее в течение нескольких секунд (6–8 кашлевых толчков). Собранный материал необходимо исследовать в день получения (в исключительных случаях – хранить при температуре 2–8°С не более 12 ч).
Мазки со слизистой носоглотки для диагностики кори (культуральные и исследования, выделение РНК) – для взятия материала используют стерильный ватный тампон, которым протирают слизистую оболочку носоглотки с достаточным усилием, чтобы снять часть эпителиальных клеток. Тампоны помещают в маркированные стерильные пробирки с завинчивающимися крышками, в которых содержится 2–3 мл транспортной среды для вирусов. Если образец не может быть доставлен в вирусологическую лабораторию в течение 48 часов при температуре 4–8°С, пробирку с тампоном следует энергично встряхнуть так, чтобы смыть клетки, а затем извлечь тампон. Смывы центрифугируют при температуре 4°С при 500g (1500 об./мин) в течение 5 минут, затем осадок ресуспендируют в 2 мл питательной среды для клеточных культур.
Ресуспендированный осадок и надосадочную жидкость хранят раздельно при температуре –70°С и транспортируют в лабораторию на сухом льду в герметично закрытых флаконах, чтобы избежать попадания в них углекислоты.
Мазки из носоглотки для обнаружения антигенов внутриклеточных патогенов собирают стерильными зондами с вискозными тампонами из нижнего носового хода. Зонд с тампоном вводят легким движением по наружной стенке носа на глубину 2–3 см до нижней раковины. Затем зонд слегка опускают книзу, вводят в нижний носовой ход под нижнюю носовую раковину глубоко (вплоть до слез у пациента), делают вращательное движение и удаляют вдоль наружной стенки носа. После взятия материала тампон помещают в пробирку с 3 мл 0,1 моль/л фосфатно-солевого буферного раствора. Для получения суспензии клеток тампон в пробирке тщательно отжимают о стенки пробирки, тампон удаляют, пробирку закрывают. Проводят центрифугирование в течение 5 мин при 3000 об/мин для осаждения клеток. Надосадочную жидкость осторожно удаляют, а осадок клеток ресуспендируют в нескольких каплях фосфатно-солевого буферного раствора и наносят на предметные стекла (не менее 3 шт.) раздельными каплями. Препарат высушивают и фиксируют 10 мин в охлажденном до 2–8°С химически чистом ацетоне. Фиксированные предметные стекла хранят при температуре 2–8°С не более 6–7 дней.
Вирус гриппа а/b, качественное определение рнк (influenza virus a/b, quality, rna) — узнать цены на анализ и сдать в москве
Определение РНК вируса гриппа в соскобе эпителиальных клеток ротоглотки и носоглотки методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с детекцией в режиме реального времени.
Грипп – острая респираторная вирусная инфекция, передаваемая воздушно-капельным путем.
Возбудители гриппа – РНК-содержащие вирусы, относящиеся к семейству Orthomyxoviridae, в котором выделяют три рода: Influenza A virus, Influenza B virus, Influenza C virus.
Вирусы гриппа А и В ежегодно вызывают эпидемии большей или меньшей интенсивности практически во всех странах мира. Вирусы гриппа А широко распространены в природе, их выделяют у большинства зверей и птиц, в связи с чем они имеют высокий пандемический потенциал, так как способны преодолевать межвидовый барьер. Основной причиной возникновения эпидемий и пандемий гриппа является высокая вариабельность вируса вследствие изменений в его геноме. Это касается фрагментов, кодирующих поверхностные антигены вирусов типов А и В и определяющих их специфичность.
Вирусы Influenza А и B поражают преимущественно верхние отделы дыхательных путей: нос, горло, трахею и реже бронхи. Однако симптомы общей интоксикации при гриппе доминируют над умеренными катаральными проявлениями. Обычно заболевание сопровождается резким повышением температуры, мышечными и головной болями, сильным недомоганием, сухим кашлем, болью в горле и слизистыми выделениями из носа. Для гриппа, обусловленного новым или значительно измененным вирусом (например, для гриппа птиц типа А(H5N1) и А(H7N9), реже А (H1N1) pdm 2009), характерно острейшее, молниеносное начало, развитие различных вариантов токсикоза (нейротоксикоза, инфекционно-токсического шока в сочетании с гемодинамическими расстройствами) и III степени ДВС-синдрома (гемокоагуляционного шока).
Диагностика инфекции осуществляется комплексно, на основании анамнестических данных о контакте с больными гриппом и характерной клинической картины. Подтверждение диагноза возможно с помощью лабораторных исследований, что целесообразно при наличии клинических проявлений гриппа, в эпидемический сезон роста заболеваемости острыми респираторными инфекциями, при тяжелом течении респираторных болезней.
В качестве базовых тестов могут быть использованы следующие лабораторные исследования: определение антигенов вируса гриппа в мазках слизистой носа и ротоглотки методом непрямой иммунофлуоресценции или иммунохроматографии; определение антител к антигенам вируса гриппа А/B в сыворотке крови методом ИФА. Результаты ИФА, как правило, оцениваются ретроспективно. Вследствие поздней диагностики они не влияют на коррекцию терапии, но применимы в научных целях и для эпидемиологического надзора и контроля за гриппом. Наиболее современным методом лабораторной диагностики гриппа является выявление РНК вируса методом ПЦР.
Максимального уровня специфичности и чувствительности достигают тесты на основе ПЦР-ОТ (полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов амплификации в режиме реального времени, позволяющие обнаруживать в биологическом материале РНК возбудителя инфекции.
Аналитические показатели:
определяемый фрагмент – специфический участок нуклеиновой кислоты вирусов гриппа А (Influenza virus A) и гриппа В (Influenza virus B);
специфичность обнаружения – отсутствие неспецифических реакций в отношении других вирусных и бактериальных возбудителей ОРЗ.
Аналитическая чувствительность:
вирус гриппа А (Influenza virus A) – 1х10^3 ГЭ/мл пробы;
вирус гриппа В (Influenza virus В) – 1х10^3 ГЭ/мл пробы.
Когда делают пцр анализ на грипп и орви?
Проведение молекулярно-генетического исследования соскоба эпителиального слоя слизистых покровов ротоглотки необходимо при:
- наличии у пациента признаков инфекционного процесса дыхательных путей, который сопровождается интоксикационным синдромом;
- дифференциальном диагностировании острых бактериальных и вирусных респираторных заболеваний;
- выборе тактики специфического противовирусного лечения.
От-пцр – метод обратной транскрипции — полимеразной цепной реакции
Содержание
4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ.
БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Организация и проведение лабораторной диагностики заболеваний, вызванных высокопатогенными штаммами вируса гриппа типа А (ВГА), у людей
Временные методические рекомендации
1.1. В настоящих методических рекомендациях определены порядок сбора, упаковки, хранения, транспортирования и выполнения лабораторных исследований биологического материала от больных (и умерших) пациентов при лабораторной диагностики заболеваний, вызванных высокопатогенными штаммами вируса гриппа типа А (ВГА).
1.
2 Методические рекомендации предназначены для специалистов органов и учреждений Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, а также могут быть использованы лечебно-профилактическими и другими организациями, независимо от организационно-правовой формы.
2. Общие требования
Все работы по сбору, транспортированию и подготовке проб клинического и секционного материала осуществляют в строгом соответствии с требованиями МУ 3.4.1028 – 01 «Организация и проведение первичных мероприятий в случаях выявления больного (трупа), подозрительного на заболевания карантинными инфекциями, контагиозными вирусными геморрагическими лихорадками, малярией и инфекционными болезнями неясной этиологии, имеющими важное международное значение», СП 1.3.
1285 – 03 «Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности)», СП 1.2.036-95 «Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности», МУ 1.3.1794-03 «Организация работы при исследованиях методом ПЦР материала, инфицированного микроорганизмами I-II групп патогенности».
3. Координация деятельности учреждений, осуществляющих диагностику ВГА
3.1. При эпидемическом неблагополучии в России и за рубежом по ВГА и при отсутствии лабораторно подтвержденных случаев заболевания людей на данной территории:
3.1.1 Забор материала от пациентов (или умерших) с подозрением на инфекцию ВГА проводят в лечебно-профилактических учреждениях (ЛПУ) после изоляции больного.
3.1.
2 Первичное исследование материала от больного осуществляют методами ОТ-ПЦР, ПЦР в режиме реального времени или методом ПЦР с флуоресцентной детекцией результата по конечной точке на базе вирусологических лабораторий ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъектах Российской Федерации или лабораторий учреждений противочумной системы Роспотребнадзора (в соответствии с перечнем – приложение 3).
Исследование проводят методами ОТ-ПЦР или РТГА с антигенами на субтипы вируса H1N1, H3N2 (пр-ва НИИ гриппа, Санкт-Петербург). При исследовании методом ОТ-ПЦР анализ проводится в два этапа:
Ко второму этапу анализа следует приступать при получении положительного результата по обнаружению вируса гриппа А на первом этапе.Интерпретация результатов исследованияОбнаружив грипп А с помощью тестов «АмплиСенс Influenza virus A/B-FL» или «АмплиСенс Influenza virus A/H5N1-FL» (в реакции с ПЦР-смесь-1-FEP/FRTInfluenzavirusA), и получив отрицательные результаты с тестом «АмплиСенс® InfluenzavirusA-тип-FL», можно сделать вывод, что в образце присутствует нехарактерный для популяции людей вирус гриппа А (свиней или птиц).Такие образцы (изоляты) без проведения выделения возбудителя на биосистемах культивирования в ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъектах Российской Федерации требуют детального исследования в одной из референс-лабораторий (приложение 1), так как они являются потенциально пандемически-опасными. В случае положительного результата второго этапа анализа больному ставится диагноз «сезонный грипп» и может быть проведено в ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъектах Российской Федерации выделения возбудителя на биосистемах культивирования.При наличии теста для идентификации вируса гриппа свиней А/H1 (например комплект реагентов «АмплиСенс® Influenza virus А/H1-swine-FL» производства ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора) исследование проводится после получения положительного результата на первом этапе (обнаружение вируса гриппа А). В случае положительного результата при исследовании с антигенами на субтипы вируса H1N1, H3N2 (пр-ва НИИ гриппа, Санкт-Петербург) больному ставится диагноз «сезонный грипп».3.1.
3 При выявлении положительных результатов первичного исследования материал от больного отправляется на подтверждающее тестирование в референс – лабораторию (в соответствии приложением 3).
В связи с тем, что вследствие мутаций вновь появившиеся высокопатогенные штаммы вируса гриппа свиней изменили свои антигенные свойства, на настоящем этапе детекция вируса методом иммунофлуоресцирующих антител (МФА) может быть не эффективной (давать ложноположительные и ложноотрицательные результаты).
3.1.
4 Подтверждающее тестирование положительных образцов осуществляется в референс-лаборатории (приложение 1) с обязательным использованием двух методов: вирусологического исследования (выделение вируса должно осуществляться в условиях лаборатории с уровнем защиты BSL-3) и одного из вариантов ПЦР.
Результаты исследований в каждом случае передают в ЛПУ, направившее материал, и в учреждения Роспотребнадзора (управление Роспотребнадзора по субъекту Российской Федерации и ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъекте Российской Федерации) в день получения результата.
3.1.5.
При получении положительных результатов подтверждающего тестирования референс-лаборатория проводит изоляцию вируса, изучение его свойств и депонирование в Национальном центре верификации диагностической деятельности, осуществляющий функции государственной коллекции, расположенной на базе ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор».
3.2.
При наличии лабораторно подтвержденных случаев заболевания людей ВГА на данной территории и при наличии следующих данных эпидемиологического анамнеза:- контакт в течение срока менее чем 7 дней до появления первых клинических признаков с больным, у которого лабораторно подтверждено инфицирование высокопатогенными штаммами гриппа;- контакт в течение срока менее чем 7 дней до появления первых клинических признаков с больным острым респираторным заболеванием неясной этиологии, в том числе закончившимся летально;- наличие профессионального риска инфицирования (врачи-инфекционисты, сотрудники подразделений, работающих с вирусом гриппа) 3.2.
1 Забор материала проводит специально обученный персонал лечебно-профилактических учреждений (ЛПУ).
3.2.2 Первичное исследование материала осуществляют на базе вирусологических лабораторий ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъектах Российской Федерации или лабораторий учреждений противочумной системы Роспотребнадзора (в соответствии с перечнем – приложение 3).
3.2.
3 Подтверждающее тестирование положительных образцов осуществляется в референс-лаборатории(приложение 1) с обязательным использованием двух методов: вирусологического исследования (выделение вируса должно осуществляться в условиях лаборатории с уровнем защиты BSL-3)и одного из вариантов ПЦР.
Результаты исследований в каждом случае передают в ЛПУ, направившее материал, и в учреждения Роспотребнадзора (управление Роспотребнадзора по субъекту Российской Федерации и ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъекте Российской Федерации) в день получения результата.
3.3.
При исследовании образца от больного, имеющего в анамнезе контакт с лицами, которым был поставлен лабораторно подтвержденный диагноз «грипп, вызванный высокопатогенным штаммом вируса гриппа свиней»:
3.3.1 Забор материала проводят в ЛПУ при подозрении на заболевание ВГА.
3.3.
2 Первичное исследование материала осуществляют на базе вирусологических лабораторий ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъектах Российской Федерации или лабораторий учреждений противочумной системы Роспотребнадзора (в соответствии с перечнем – приложение 3) с использованием ОТ-ПЦР.
3.3.
4 Правила сбора клинического (секционного) материала
4.1 Сбор клинического материала и его упаковку осуществляет медицинский работник лечебно-профилактического учреждения, обученный требованиям и правилам биологической безопасности при работе и сборе материала, подозрительного на зараженность ВГА. Забор производят в стерильные одноразовые флаконы, пробирки, контейнеры, стерильными инструментами.
Все виды работ проводят с соблюдением противоэпидемического режима, согласно СП 1.3 1285 – 03 «Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности)».
4.2 Упаковка, маркирование, условия хранения и транспортирования материала для проведения лабораторной диагностики ВГА должны соответствовать требованиям СП 1.2.
Целесообразно также включать в исследование аспираты из трахеи, бронхоальвеолярный лаваж и биоптаты легких при возможности их забора. Данные процедуры осуществляет подготовленный медицинский персонал в соответствии с МУ 3.4.1028 – 01 «Организация и проведение первичных мероприятий в случаях выявления больного (трупа), подозрительного на заболевания карантинными инфекциями, контагиозными вирусными геморрагическими лихорадками, малярией и инфекционными болезнями неясной этиологии, имеющими важное международное значение».
Перечисленные выше процедуры по забору клинического материала обученный медицинский персонал осуществляет в средствах индивидуальной защиты органов дыхания (респиратор типа ШБ-1 или РБ «Лепесток-200»), защитных очках или щитках для защиты лица, бахилах, двойными резиновыми перчатками.
После процедуры отбора материала перчатки обрабатываются растворами дезинфицирующих средств, руки после снятия перчаток обрабатываются антисептиками в соответствии с СП 1.3. 1285 – 03 «Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности)».
Выбор времени забора клинического материала очень важен, так как наиболее высокое содержание вируса в дыхательных органах человека регистрируется в течение первых четырех дней после появления признаков заболевания. Образцы должны быть собраны в течение 3 суток после появления клинических признаков, указанных в п. 6.1.
Для постмортальной диагностики используют аутоптаты легких, трахеи и селезенки.
От одного больного должно забираться не менее трех видов клинического материала. Обязательно следует забирать мазки из полости носа и ротоглотки и носоглоточное отделяемое.
Каждый образец материала помещают в отдельную транспортную емкость.
4.4 Сбор материала производят в пробирки со стабилизирующей средой, приготовленной согласно приложению 4, и/или в пробирки с транспортной средой, предоставляемой (или рекомендуемой) фирмой-производителем тест-систем.
4.5 Отправку материала в лабораторию осуществляют в транспортной таре со стабилизирующей средой (приложение 4).
5. Упаковка и транспортирование образцов
5.1 Все материалы, доставляемые в лабораторию, должны быть герметично упакованы в соответствии с СП 1.2.036-95 «Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности»:
1) в транспортную емкость (плотно закрывающиеся пластмассовые пробирки или флаконы с завинчивающимися крышками, проверенные на герметичность); плотно закрытый верхний конец транспортной емкости вместе с крышкой герметизируют различными пластификаторами (парафин, парафильм и др.); емкость маркируют.
2) в плотный полиэтиленовый пакет подходящего размера с ватой (или другим гигроскопичным материалом) в количестве достаточном для адсорбции всего образца в случае его утечки; полиэтиленовый пакет следует герметично заклеить или запаять.
5.1.1.
В отдельный полиэтиленовый пакет вкладывают бланк направления с указанием: наименование направляющего учреждения, ФИО больного, возраст, место жительства, предварительный диагноз, эпидемиологический анамнез, вид материала, дата и время взятия материала.
5.1.
2 Пакеты с образцами от одного пациента вместе с направлением упаковывают во второй плотный полиэтиленовый пакет. Не допускается упаковывание образцов материалов от разных людей в один и тот же пакет.
5.2 Герметично закрытые полиэтиленовые пакеты помещают в термоизолирующий плотно закрывающийся контейнер (термос), приспособленный для транспортирования биологических материалов.
5.2.1.
В термоконтейнеры и термосы помещают охлаждающие элементы или пакеты со льдом. К наружной стенке термоконтейнера или термоса прикрепляют этикетку с указанием вида материала, условий транспортирования, названия пункта назначения. Сроки и условия транспортирования упакованных проб клинического материала указаны в приложении 2.
5.
3 Транспортирование проб клинического материала в референс-лабораторию, вирусологические лаборатории и лаборатории учреждений противочумной системы Роспотребнадзора осуществляется нарочным (и), информированным о правилах доставки материала в соответствии с п.3.4. СП 1.2.036-95.
6. Порядок проведения лабораторных исследований
6.1 При отсутствии лабораторно подтвержденных случаев заболевания людей на данной территории лабораторные исследования с целью диагностики ВГА следует проводить у пациентов с респираторными заболеваниями тяжелого течения и неясной этиологии при наличии как минимум двух из перечисленных симптомов:- фебрильная лихорадка с температурой тела выше 380C;
— насморк или заложенность носа;
— боль в горле;
— кашель;
— затрудненное дыхание или дыхательная недостаточность.
в комбинации хотя бы с одним из следующих эпидемиологических признаков в период 1-7 дней перед появлением симптомов :- посещение мест регистрации заболевания ВГА у людей;
— тесный контакт (в радиусе 1 метра) с лицом, являющимся подозрительным, вероятным или подтвержденным случаем ВГА;
— контакт с погибшими или больными свиньями, уход, убой, разделка, подготовка к употреблению свинины, или контакт с их останкам или объектами окружающей среды на территории, где в течение последнего месяца были заподозрены или подтверждены случаи инфекции ВГА у животных или людей;
— манипуляции с образцами клинического материала (от животных или людей), подозрительным на зараженность ВГА в лаборатории или в иной обстановке;
— употребление сырых или недостаточно приготовленных продуктов из свинины на территории, где в течение последнего месяца были заподозрены или подтверждены случаи инфекции ВГА у животных или людей.
— тесный контакт с лабораторно подтвержденными инфицированными ВГА животными.
Данный случай расценивается как подозрительный случай ВГА.
Вероятный случай ВГА — лицо, умершее от необъясненного острого респираторного заболевания, которое расценивается как эпидемиологически связанное по времени, месту и экспозиции с вероятным или подтвержденным случаем ВГА, а также лицо, отвечающее критериям для подозрительного случая, и одному из дополнительных критериев:
6.2. При наличии лабораторно подтвержденных случаев заболевания людей ВГА на данной территории показанием к обследованию являются клинические симптомы, приведенные в п.6.1. Дополнительные эпидемиологические признаки являются необязательными.
6.3.
Исследование секционного материала от умерших на наличие вируса ВГА проводят при:
— сходстве клинической картины заболевания, приведшего к летальному исходу, с описанной в п. 6.1 или невозможности исключения такой клинической картины в анамнезе и при наличии в анамнезе хотя бы одного из перечисленных в п.п. 6.
1 дополнительных эпидемиологических признаков.
6.4. Исследования проводят с использованием диагностических тест-систем, разрешенных к применению в установленном порядке.
6.5. При проведении первичного тестирования на наличие вируса ВГА должны исследоваться не менее 2 видов клинического материала (например: мазки из полости носа и из ротоглотки) с использованием метода — ОТ-ПЦР.
6.6.
При получении отрицательных результатов исследования всех образцов выдается окончательный отрицательный ответ.
При отсутствии регистрации заболевания людей, вызванных ВГА, на данной территории при получении хотя бы одного положительного результата при использовании ОТ-ПЦР выдается предварительный положительный ответ и образцы направляют для подтверждающего тестирования в референс-лабораторию.
В период регистрации заболевания людей, вызванных ВГА на данной территории, обязательное подтверждающее тестирование не проводят, и при получении хотя бы одного положительного результата при использовании ОТ-ПЦР выдается окончательный положительный ответ.
6.7.
При подтверждении в референс-лаборатории положительного результата первичного тестирования, при исследовании хотя бы одного вида клинического материала выдается окончательный положительный ответ.
При получении в референс-лаборатории отрицательных результатов исследования двух видов клинического материала проводится повторное тестирование. При получении аналогичного результата выдается окончательный отрицательный ответ.
Правила подготовки к анализу
Накануне процедуры пациенту необходимо:
- исключить использование антисептических средств для полоскания ротоглотки;
- отменить применение противомикробных и антибактериальных спреев для горла;
- отказаться от распития алкогольных напитков;
- воздержаться от чистки зубов и использования жевательной резинки.
Расшифровка анализа
Итоговые данные исследования выдаются в качественных значениях.
Отрицательный результат анализа свидетельствует о том, что в исследуемом образце не выявлены компоненты генетического материала ни одного из возбудителей инфекции.
Положительный результат анализа указывает на наличие фрагментов генома вируса, который превышает пороговый уровень – этот факт подтверждает его этиологическую роль в развитии острого респираторного заболевания.
Памятка по забору клинического материала для исследования на грипп и орви
Важнейшим этапом исследований является получение полноценного клинического материала, в котором должно содержаться большое количество эпителиальных клеток, которые выстилают глубокие отделы нижних носовых ходов и служат местом размножения вирусов.
Правила забора мазка из носа для изоляции вирусов и люминесцентной микроскопии (РИФ).
Забор материала производится в пробирку с транспортной средой, выданную специалистами вирусологической лаборатории ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Астраханской области».
Перед взятием материала полость носа больного очищается тампоном, освобождается от слизи, лейкоцитов, слущенных клеток (провести высмаркивание). Больной при взятии материала должен сидеть, откинувшись на спинку стула, с приподнятой кверху головой и дышать ртом. Детей до 7 лет, во избежании травм, необходимо посадить на колени ассистента, который будет удерживать руки и голову ребенка. Приподняв кончик носа левой рукой, в полость носа вводят сухой велюр-тампон (зонд на пластиковом аппликаторе) легким движением по наружной стенке носа. При этом палочку держат правой рукой как писчее перо, тампон вводят на глубину 2-3 см до нижней раковины. Затем велюр-тампон слегка опускают книзу, вводят в нижний ход под нижнюю раковину, делают легкое вращательное движение на пол-оборота и удаляют тампон вдоль наружной стенки носовой полости. Велюр-тампон сразу погружают в пробирку с 2 мл транспортной средой (палочку обломить так, чтобы флакон закрылся пробкой).
Материал необходимо доставить в вирусологическую лабораторию по адресу: ул. Н.Островского 138, 2 этаж, тел. 50-30-09 с соблюдением «холодовой цепи» в день забора материала.
При необходимости практические навыки и консультацию можно получить у сотрудников вирусологической лаборатории.
Взятие материала от больного для ОТ-ПЦР исследования.
Забор материала проводится аналогично, но в пластиковую пробирку типа Эппендорф с 0,5 мл транспортной среды, выданную специалистами лаборатории эпиднадзора за ООИ (ПЦР отделение) ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Астраханской области» Материал необходимо доставить в ПЦР отделение по адресу: ул. Н.Островского 138, 5 этаж, тел. 33-54-18.
Исследования проводятся с целью мониторинга за циркуляцией вирусов гриппа и ОРВИ на территории Астраханской области по распоряжению или предписанию Управления Роспотребнадзора по Астраханской области.
Образец направления на лабораторное исследование:
НАПРАВЛЕНИЕ
на группу респираторных вирусов (грипп, парагрипп, РС-, аденовирусы)
на выделение вируса гриппа/ иммунофлюоресцентное исследование -РИФ / / ПЦР исследование _______________________________________________________________
(нужное подчеркнуть)
Ф.И.О. больного
Возраст (число, месяц, год)
Домашний адрес
ЛПУ, доставившее материал, отделение
Беременность
Диабет
Ожирение
ВИЧ инфицированный
Заболевания сердечно-сосудистой системы
Заболевания легочной системы
Вакцинация против гриппа (дата, серия)
Прием противовирусных препаратов (название, сколько дней)
Прибыл из зарубежной страны (указать страну)
Диагноз
Дата заболевания
Дата госпитализации в ЛПУ
Дата и время забора материала
Дата и время отправки в лабораторию
Дата и время доставки материала в лабораторию
Ф.И.О. лица проводившего забор клинического материала
Результат