Буккальные эпителиоциты как инструмент клинико-лабораторных исследований

На чтение 15 мин Опубликовано
Содержание
  1. Иногда достаточно и волоса. разбираемся, как работает днк-тест на отцовство
  2. Как взять мазок из полости рта (буккальный эпителий)
  3. Литература

Иногда достаточно и волоса. разбираемся, как работает днк-тест на отцовство

Человек наследует половину генетического материала от матери, половину — от отца. Это далеко не всегда означает, что ребенок будет похож на родителей. Внешность и характер могут отличаться, но ДНК никогда не врет: генетический анализ помогает найти друг друга близким людям или восстановить справедливость.

Как проводится тест на отцовство? Какие материалы для него нужно предоставить? И всегда ли результат достоверен? С этими и другими вопросами мы отправились в Центр генетики «Наследие».

Наталья Цегалко
специалист-консультант по генетическим исследованиям
Центра генетики «Наследие»

Тест на отцовство — один из самых востребованных анализов ДНК?

— Да, действительно. Это один из самых частых запросов. Чуть отстает от теста анализ на родство, когда требуется установить, есть ли генетическая связь с другими предполагаемыми родственниками. А вот тест на материнство на последнем месте.

Тест на отцовство можно провести и без предполагаемого отца. Тогда сравниваются результаты генетического анализа ребенка и близких родственников мужчины. Этот метод помогает, если возможный папа вынужден долго находиться за границей, не хочет проходить тест или его уже нет в живых. При этом достоверность анализа остается прежней.

А какую точность обещают эти анализы?

— Достоверность родства (если оно выявлено) составляет 99,9%, при отрицательном итоге в бланке с результатом будет написано, что вероятность родства — 0%.

Лаборатории не смогут гарантировать высокую точность лишь в случае, если проводится генетический анализ данных дальних родственников мужчины, например, двоюродного брата или сестры.

Почему нельзя дать гарантию в 100%?

— Во-первых, мы не можем исключить наличия у мужчины брата-близнеца, а у таких родственников ДНК практически идентичны.

Во-вторых, процент высчитывается по определенным маркерам. Анализируется каждый из них, затем выводится так называемый индекс отцовства. А по нему — итоговые проценты.

Что подойдет в качестве материала для исследования?

— Чаще всего анализируется буккальный эпителий отца и ребенка. Его собирают на внутренней стороне щеки. Генетический материал матери для данного анализа не требуется.

Забор материала — несложная и безболезненная процедура. Бояться ее точно не стоит. Просто нужно провести специальной палочкой по слизистой. Это займет всего пару секунд.

Для исследования пригоден и другой материал, содержащий ДНК, например, ногти, ушная сера, предметы со следами буккального эпителия (ложка, стакан или трубочка для сока, воздушный шарик). Из продуктов, которые надкусил человек, очень сложно выделить необходимый материал для исследования, так как это органика, которая под действием реагентов легко растворяется, однако иногда получается и с ними. Тут придется принять риск того, что, возможно, анализ вообще не удастся провести.

Во многих фильмах мы нередко видим, что для исследования отрезается прядь волос. Выглядит красиво, но в жизни такой локон не подойдет. Волос обязательно должен быть извлечен вместе с луковицей. Именно из нее выделяется генетический материал для определения отцовства. Причем это очень сложный процесс. Не каждая луковица подойдет для такого анализа. По отрезанной же пряди можно определить родство только по женской (материнской) линии.

Независимо от предоставленного материала, если анализ провести удалось, достоверность будет такая же, как и при заборе буккального эпителия.

Екатерина Прохорова
специалист-консультант по генетическим исследованиям
Центра генетики «Наследие»

Как проводится тест?

— В лаборатории создается множество копий ДНК, а затем специалисты при помощи аппаратуры сравнивают определенные участки ДНК (локусы). Чем больше локусов сравнивается, тем точнее ответ. Для результата достаточно и 16 локусов, но, чтобы перестраховаться, в лабораториях нередко исследуется большее количество — вплоть до 25. Брать еще больше просто нет смысла. Достоверность не изменится. Для исключения ошибки результаты перепроверяются двумя группами экспертов.

Как долго нужно ждать результатов?

— До 8 рабочих дней, но, как правило, результаты появляются быстрее. Время ожидания зависит от сложности анализа (например, если предоставлен нестандартный материал для исследования). Только аппарат выделяет чистый профиль для теста сутки. После чего он еще должен быть проанализирован специалистами лаборатории.

К слову, тест на материнство проводится точно так же.

Существует ли способ проверить отцовство до появления
малыша на свет?

— Да, но это исследование сложнее и, соответственно, всегда дороже.

Для анализа забирается венозная кровь матери. Из нее выделяется ДНК плода. Как? Плацента растет и развивается. Разрушенные клетки уходят в кровоток матери. И уже к определенному сроку (обычно это 10-я неделя) накапливается нужная концентрация этих клеток (необходимый показатель — около 5%), чтобы выделить генетический материал плода и сравнить его с ДНК предполагаемого отца. Исследование длится около месяца.

Какая информация указана в бланке с результатом?

— Там размещены все имеющиеся данные о предоставленном генетическом материале, об исследовании и информация о ребенке и предполагаемом отце. Кстати, для суда бланк с результатом без указания данных предполагаемого отца считается недействительным. То есть, если вы хотите провести тайный анализ, результат будет полезен только для вас. Суд же постановит провести повторный тест с указанием личности предполагаемого отца или его родственников.

Далее в ответе идет само заключение (доказано отцовство или исключается), прописываются все цифры (вероятность отцовства, индекс отцовства, таблица с анализируемыми маркерами). В общем, ответ достаточно развернутый. Но по любым вопросам обратившегося обязательно сориентируют и все объяснят.

Фото: Александр Задорин

Как взять мазок из полости рта (буккальный эпителий)

Взять мазок из полости рта просто

– убедитесь, что с момента последнего приема пищи, питья и чистки зубов прошло

не менее одного часа

, и

следуйте нашей инструкции

:

1Аккуратно достаньте первую палочку из упаковки.

Не касайтесь тампона на конце палочки пальцами или чем-либо еще. Упаковка больше не нужна, ее можно выбросить.

2Круговыми движениями потрите тампоном внутреннюю часть одной щеки в течение 30 секунд.

Следите, чтобы тампон касался только внутренней части щеки и не касался ничего другого.

3Подержите палочку в руках около 5 минут, пока тампон не высохнет.

Палочку можно поставить в пустой стакан или чашку тампоном вверх.

4Положите палочку с сухим тампоном в этот конверт.

5Повторите те же самые шаги со второй палочкой:

Аккуратно достаньте вторую палочку из упаковки ➔ Круговыми движениями потрите тампоном внутреннюю часть другой щеки в течение 30 секунд ➔ Подержите палочку в руках около 5 минут, пока тампон не высохнет ➔ Положите вторую палочку с высушенным тампоном в этот конверт.

Высушенные палочки нужно свободно поместить в этот конверт – без дополнительной упаковки. В конверте должны находиться только палочки.
Если во время вскрытия упаковки или взятия мазка палочка упала – пожалуйста, выбросите ее.

В лаборатории тканевого типирования мы проведем исследование ваших образцов и определим генотип. После того как данные будут внесены в регистр, Вы станете потенциальным донором костного мозга.

Подать заявку на набор для взятия буккального эпителия

Литература

  1.   Rastogi D., Rather A.G., Prince A. Host-bacterial interactions in the initiations of inflammation. Paediatr Respir Rev 2001; 2: 245—252.
  2.   Svanborg С., Godaly G., Hedlund M. Cytokine responses during mucosal infections: role in disease pathogenesis and host defence. Curr Opin Microbiol 1999; 2: 99—105.
  3.   Godaly G., Bergsten G., Hang L., Fiscer H., Frendeus B., Lundstedt A.-C., Samuelsson M., Samuelsson P., Svanborg C. Neutrophil recruitment, chemokine receptors, and resistance to mucosal infection. J. Leukoc Biol 2001; 69: 899—906.
  4.   Holgate S.T., Lackie P.M., Davies D.E., Roche W.R., Wali A.F. The bronchial epithelium as a key regulator of airway inflammation and remodeling in asthma. Clin Exp Allergy 1999; 29(suppl 2): 90—95.
  5.   Polito A.J., Proud D. Epithelil cells as regulators of airway inflammation. J Allergy Clin Immunol 1998; 102: 714—718.
  6.   Mills P. R., Davies R.J., Devalia J.L. Airway epithelial cells, cytokines and pollutants. Am J Resp Crit Care Med 1999; 160(5Pt2 ): 38—43.
  7.   Kagnoff M.F., Eckmann L. Epithelial cells as sensors for microbial infection. J Clin Ivest 1997; l00: 6—10.
  8.   Takizawa H. Airway epithelial cells as regulators of inflammation. Int J Mol Med 1998; 1: 367—378.
  9.   Хаитов М.Р. Острые респираторные вирусные инфекции и бронхиальная астма. Клеточные и молекулярные аспекты проблемы. Ж микробиол 2002; 4: 84—93.
  10.   Stadnyk A.W. Cytokine production by epithelial cells. FASEB J 1994; 8: 1041—1047.
  11.   Domachowske J.B., Bonville C.A., Rosenberg H.F. Gene expression in epithelial cells in response to pneumo­virus infection. Respir Res 2001; 2: 225—228.
  12.   Walter M.J., Kajiwara N., Karanja P., Castro M., Holtzman M.J. Interleukin 12 p40 production by barrier epithelial cells during airway inflammation. J Exp Med 2001; 193: 339—351.
  13.   Mattoli S. Allergen-induced generation of mediators in the mucosa. Environ Health Perspect 2001; 109: 553—557.
  14.   Быков В.Л. Функциональная морфология эпителиального барьера слизистой оболочки полости рта . Стоматология 1997; 3: 12—16.
  15.   Yanagita M., Shimabucuro Y., Nozaki T. et al. IL-15 up-regulates iNOS expression and NO production by gingival epithelial cells. Biochem Biophys Res Commun 2002; 297: 329—334.
  16.   Wehkamp J., Schwind В., Herrlinger K.R., Baxman S., Schmidt K., Duchrow M., Wohlschlager C., Feller A.C., Stange E.F., Fellermann K. Innate immunity and colonic inflammation: enhanced expression of epi­the­lial alpha-defensins. Dig Dis Sci 2002; 47: 1349—1355.
  17.   Colgan S.P. Lipid mediators in epithelial cell-cell interactions. Cell Mol Life Sci 2002; 59: 754—760.
  18.   Schmalz G., Schweiki H., Hiller K.A. Release of prosta­glandin E2, IL-6 and IL-8 from human oral epithelial culture models after exposure to compounds of dental materials. Eur J Oral Sci 2000; 108: 442—448.
  19.   Ellmerich S., Djouder N., Scholler M., Klein J.P. Production of cytokines by monocytes, epithelial and endothelial cells activated by Streptococcus bovis. Cytokine 2000; 12: 26—31.
  20.   Mannhardt W., Beutel K., Habermehl P., Knuf M., Zepp F. The interaction of mucosal epithelial cells with E.coli bacteria enhances the intraepithelial calcium flux and the release of prostaglandin E2. Int Uro­gynecol J Pelvic Floor Dysfunct 1999; 10: 308—315.
  21.   Smith J.K., Chi D.S., Krishnaswamy G., Srikanth S., Reynolds S., Berk S.L. Effect of interferon alpha on HLA-DR expression by human buccal epithelium. Arch Immunol Ther Exp (Warsz) 1996; 44: 83—88.
  22.   Smith J.K., Siddiqui A.A., Krishnaswamy G.A., Dykes R., Berk S.L., Magee M., Joiner W., Cummins J. Oral use of finterferon-alpha stimulates ISG-15 trans­cription and production by human buccal epithelial cells. J Interferon Cytokine Res 1999; 19: 923—928.
  23.   Farmer I., Freysdottir J., Dalghous A.M., Fortune F. Expression of adhesion and activation molecules in human buccal spithelial cell lines and normal human buccal epithelium in situ. J Oral Pathol Med 2001; 30: 13—120.
  24.   Eberhard J., Jepsen S., Tiemann M. et al. Leucotriene A(4)-hydrolase expression and leucotriene B(4) levels in chronic inflammation of bacterial origin: immuno­histochemistry and reverse-phase high-performance liquid chromatography analysis of oral mucosal epithelium. Virchows Arch 2002; 440: 627—634.
  25.   Rouabhia M., Ross G., Page N., Chakir J. Interleukin-18 and gamma interferon production by oral epithelial cells in response to exposure to Candida albicans or lipopolysaccaride stimulation. Infect Immun 2002; 70: 7073—7080.
  26.   Гемонов В.В., Могильный М.Л. Защитные свойства поверхностных слоев эпителия слизистой оболочки полости рта. Стоматология 1996; 3: 4—6.
  27.   Williams D.W., Walker R., Lewis M., Allison R.T., Potts A.J. Adherence of Candida albicans to oral epithelial cells differentiated by Papanicolaou staining. J Clin Pathol 1999; 52: 529—531.
  28.   Цепов Л.М., Левченкова Н.С., Золотарева О.Н., Васильева Е.И., Хромченков А.П., Николаев А.И., Жажков Е.Н. Цитогенетические показатели и электрокинетическая подвижность ядер клеток буккального эпителия в оценке состояния пародонта. Стоматология 1999; 3: 7—8.
  29.   Лукиных Л.М., Зеленова Е.Г. Значение колонизационной резистентности и местного иммунитета полости рта при кариесе зубов. Нижегород мед журнал 1999; 4: 23—27.
  30.   Хусаинова И.С., Варулева И.Ю., Кожина Н.А. Оценка цитологических показателей буккального эпителия для диагностики функционального состояния человека Клин лаб диагн 1997; 3: 10—12.
  31.   Рыжавский Б.Я., Холодок Г.Н. Изменения буккального эпителия при некоторых заболеваниях у детей. Клин лаб диагностика 1995; 2: 39—40.
  32.   Шахбазов В.Г., Колупаева Т.В., Набоков А.Л. Новый метод определения биологического возраста человека. Лаб дело 1986; 7: 404—407.
  33.   Weinmeister K.D., Dal Nogare A.R. Buccal cell carbohydrates are altered during critical illness. Am J Respir Crit Care Med 1994; 150: 131—134.
  34.   Quinn М.О., Miller V.E., Dal Nogare A.R. Increased salivary exoglycosidase activity during critical illness. Am J Respir Crit Care Med 1994; 150: 179—183.
  35.   Woods D.E., Straus D.C., Johanson W.G., Bass J.A. Role of salivary protease activity in adherence of gram-negative bacilli to mammalian buccal epithelial cells in vivo. J Clin Invest 1981; 68: 1435—1440.
  36.   Davis G., Gibbons R.G. Accessible sialic acid content of oral epithelial cells from healthy and gingivitis subjects. J Periodontal Res 1990; 25: 250—253.
  37.   Macrotte H., Lavoie M.C. Oral microbial ecology and the role of salivary immunoglobulin A. Microbiol Mol Biol Rev 1998; 62: 71—109.
  38.   Vaahtoniemi L.H., Raisanen S., Stenfors L-E. The age-dependence of bacterial presence on oral epithelial surfaces in vivo. Oral Microbiol Immunol 1992; 7: 263—266.
  39.   Маянский А.Н. Дисбактериоз: иллюзии и реальность. Педиатрия 2000; 4: 80—88.
  40.   Tsang C.S., Samaranayake L.P. Factors affecting the adherence of Candida albicans to human buccal epithelial cells in human immunodeficiency virus infection. J Dermatol 1999; 141: 852—858.
  41.   Быков В.Л., Величко Е.В. Экспериментальное изучение влияния кортикостероидных препаратов на адгезию грибов рода Candida к эпителиоцитам слизистых оболочек. Ж микробиол 1988; 8: 115—118.
  42.   Umazume M., Ueta E., Osaki T. Reduced inhibition of Candida albicans adhesion by saliva from patients receiving oral cancer therapy. J Clin Microbiol 1995; 33: 432—439.
  43.   Быков В.Л., Караев З.О., Величко Е.В. Изменения адгезии грибов Candida к эпителию в течение менструального цикла. Ж микробиол 1987; 8: 13—15.
  44.   Theaker E.D., Drucker D.B., Gibbs A.C. The possible influence of the menstrual cycle on the adherence of Candida albicans to human buccal epithelial cells in vitro. Arch Oral Biol 1993; 38: 353—355.
  45.   Герасимов И.Г., Калютская О.А. Динамика клеточных параметров буккального эпителия в течение менструального цикла у женщин. Цитология 1996; 11: 1152—1157.
  46.   Fortis A.A., Lianou P.E., Papavassilliou J.T. Adherence of Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae and Candida albicans to human buccal epithelial cells, from healthy persons and HIV carriers, under the influence of Broncho Vaxom in vitro and ascorbinic acid in vivo. APMIS 1998; 106: 441—448.
  47.   Cox F. Adherence of Candida albicans to buccal epithelial cells in children and adults. J Lab Clin Med 1983; 102: 960—972.
  48.   Darwazeh A.M., Lamey P.J., Lewis M.A., Samaranayake L.P. Systemic fluconazole therapy and in vitro adhesion of Candida albicans to human buccal epithelial cells. J Oral Pathol Med 1991; 20: 17—19.
  49.   Wu S., Guo N., Hou Y. Effects of systemic fluconazole thera­py on in vitro adhesion of Candida albicans to buccal epithelial cells and changes of cell surface pro­teins of the epithelial cells. Chin Med Sci J 1996; 11: 45—48.
  50.   Зеленова Е.Г., Салина Е.В., Маянский А.Н., Коликова Т.В., Малышева Э.Ф. Адгезия различных видов микроорганизмов в экспериментальной системе «буккальный эпителиоцит — бактерии». Нижегород мед журнал 1993; 3: 24—28.
  51.   Nair R.G., Samaranayake L.P. The effect of oral commensal bacteria on candidal adhesion to human buccal epithelial cells in vitro. J Med Microbiol 1996; 45: 179—185.
  52.   Piatti G., Gazzola Т., Allegra L. Bacterial adherence in smokers and non-smokers. Pharmocol Res 1997; 36: 481—484.
  53.   Ahmer O.R., Essery S.D., Saadi A.T., Raza M.W., Ogilvie M.M., Weir D.M., Blackwell C.C. The effect of cigarette smoke on adherence of respiratory pathogens to buccal epithelial cells. FEMS Immunol Med Microbiol 1999; 23: 27—36.
  54.   Ланкина М.В. Микрофлора зева человека как показатель определения резистентности организма. Ж микробиол 2002; 3: 97—99.
  55.   Абаджиди М.А., Молодцов С.А., Ашкинази В.И. и др. Микрофлора буккального эпителия у детей, часто болеющих респираторными инфекциями. Рос педиатр журнал 2002; 1: 56—57.
  56.   Маянский А.Н., Пичугина Л.П., Малышева Э.Ф., Червова Р.А. Естественная колонизация буккального эпителия у больных с пародонтитом. Нижегород мед журнал 1991; 3: 20—22.
  57.   Маянский А.Н., Абаджиди М.А., Маянская И.В., Разживин А.П., Сибирякова Н.И. Естественная колонизация буккального эпителия у детей с аллергическими заболеваниями. Рос педиатр журнал 1999; 3: 47—49.
  58.   Маянский А.Н., Заславская М.И., Салина Е.В., Абаджиди М.А., Ашкинази В.И., Махрова Т.В. Феномен избирательного ослабления колонизационной (адгезивной) резистентности в системе «Candida albicans — буккальные эпителиоциты». Ж микробиол 2002; 4: 17—20.
  59.   Пикуза О.И., Сигбатуллина Ф.И., Маянский А.Н. Естественная колонизация буккального эпителия у новорожденных детей. Педиатрия 1993; 4: 5—9.
  60.   Пикуза О.И., Шошина И.Г., Гервазиева В.Б. Характеристика колонизационной резистентности микрофлоры ротовой полости при применении препарата томицид. Педиатрия 1999; 3: 101—104.
  61.   Маянский А.Н., Салина Е.В., Абаджиди М.А., Ашкинази В.И., Заславская М.И. Адгезивные реакции в системе «буккальные эпителиоциты — Candida albicans» у детей с бронхиальной астмой и гастродуоденитом. Педиатрия 2002; 3: 41—43.

Оцените статью
Дача-забор
Добавить комментарий

© 2024 Дача-забор