Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт

Гистология: что это за анализ?

«Вырезка» и «фиксация»

Далее родинку внимательно осмотрят, опишут в протоколе и поместят особым образом в специальную пластиковую кассету для дальнейшего процесса. Весь процесс фиксируют на цифровую камеру. Видео понадобится в случаях неправильного расположения части родинки в кассете, когда нужно будет вернуться к этому этапу и переориентировать фрагмент.

Из промаркированного контейнера с транспортной средой извлекают родинку (невус):

Далее пигментное образование разделяют на несколько частей таким образом, чтобы для гистологического исследования были доступны все участки образования. Здесь все нужно сделать правильно, чтобы точно определить толщину меланомы по Бреслоу, состояние краев резекции кожи с опухолью – эти параметры имеют решающее значение в оценке адекватности операции и в прогнозе заболевания.

На кассете с родинкой пишут фамилию и инициалы пациента, которые были указаны на контейнере, а также QR-код и персональный числовой код.

Фрагменты размещают в кассете параллельно плоскости ее дна, как показано на картинке ниже. Если фрагмент положить перпендикулярно плоскости кассеты – это может затруднить оценку краев резекции, т. е. полноты удаления родинки или меланомы.

На правильном размещении фрагментов в кассете остановимся подробнее. Это очень важный момент, который позволяет избежать неинформативных срезов в будущем.

Чтобы исключить подобные ошибки, в процессе исследования используют автоматизированное оборудование.

После того как фрагмент уложат правильно, кассету плотно закрывают, что исключает утрату кусочков и переориентацию на последующем этапе 18–24-часовой фиксации операционного материала в специальном растворе (формалине).

Изучение препарата врачом-патоморфологом

Наконец родинка (невус) готова к изучению под микроскопом.

В современной лаборатории, такой как НЦКМД, на этом этапе также используются современные и высокие технологии. Но есть два момента, на которые, на мой взгляд, стоит обратить особое внимание.

Морфометрия

С помощью адаптера для микроскопа и специализированной программы врач-патоморфолог на экране компьютера измеряет параметры удаленной родинки в микрометрах (микронах).

Мне, как дерматоонкологу, это особенно важно для последующих измерений, к примеру, толщины по Бреслоу в случаях меланомы, а также расстояний от края опухоли до края резекции.

На картинках ниже примеры программного измерения различных участков препарата невуса кожи:

Коллегиальное мнение

До недавнего времени я не знал, что все заключения НЦКМД с диагнозом «злокачественная опухоль» выходят с подписью нескольких морфологов. Такой подход мне нравится и лишний раз подтверждает, что я не ошибся с выбором лаборатории.

Удаленные консультации

Благодаря передаче изображений препаратов на компьютер, открываются широкие возможности. На картинке ниже – специальный сканер гистологических препаратов VisionTek:

Он позволяет врачам-патоморфологам:

1. Сканировать препараты в высоком разрешении, пересылать с помощью IT-технологий в другой город или страну, обсуждая результаты исследований с коллегами в нашей стране и за рубежом.

2. Проводить презентации, клинические разборы и обучение, в том числе и телеконференции.

3. Сохранять большое число изображений препаратов, которые не требуют физического места для хранения

Как проходит исследование

Лабораторное гистологическое исследование биопсийного материала проводят традиционным и ускоренным способом. Традиционно биоматериал проходит специальную обработку для сохранения формы. Его уплотняют и нарезают на пластины толщиной в несколько микронов для исследования под микроскопом. Результат можно получить в течение 7–10 дней.

Ускоренный способ применяют в случаях, когда биопсию проводят во время операции. Онкохирургу нужен результат исследования, чтобы определить – сохранять ткани или удалять их. В этом случае биообразец в течение 1 часа замораживают, разделяют и микроскопируют.

В онкологии применяют несколько видов микроскопирования:

• световое – изучение биообразца в видимой части спектра;
• ультрафиолетовое – изучение в ультрафиолетовой части спектра;
• электронное – исследование под направленным пучком электронов;
• флуоресцентное – исследование при флуоресцентном освещении после предварительного окрашивания биообразца;
• интерференционное – определение концентрации и количественных показателей вещества в клетках;
• цитоспектрофотометрию – исследование химического состава;
• радиоавтографию – изотопную оценку активности обменных процессов.

В заключении специалист подробно описывает свойства всех видов тканей, которые были обнаружены в биообразце. Расшифровать результаты гистологии может только квалифицированный врач-онколог.

Методы гистологического исследования

Основной метод забора биоматериала из внутренних органов – биопсия. Ее проводят несколькими методами.

• Пункционный. Распространенный метод для получения биообразцов тканей печени, простаты, молочных желез. Заключается во введении в орган тонкой биопсийной иглы.
• Щипковый. Используют микроскопические щипцы, которые вводят эндоскопическим методом (бронхоскопия, колоноскопия, гастроскопия). Применяют при опухолях кишечника, пищевода, желудка, органов дыхания.
• Аспирационный. Посредством тонкой трубочки отсасывают секреторную жидкость желез, миоматозных узлов матки.
• Кюретаж. Применяют при исследовании полостей. Биоматериал соскабливают с поверхности посредством ложечки – кюреты.
• Мазок. Используется для диагностики опухолей, расположенных на слизистых оболочках. Забор проводят миниатюрной щеткой.
• Эксцизионный и инцизионный. Хирургическими инструментами иссекают часть или всю опухоль с последующим исследованием.

Специальной подготовки к гистологии не требуется. Забор биоматериала проводят натощак, чаще всего утром. Процедура проходит под местным наркозом, поэтому не вызывает болезненных ощущений. Если новообразование расположено в кожных покровах, достаточно седативных (успокаивающих) средств.

Все методы биопсии абсолютно безопасны для организма и связаны с минимальным травматизмом. Проводят процедуру под визуальным контролем врача посредством УЗИ, что исключает риск повредить органы.

Преимуществом биопсии является минимальное количество противопоказаний. К ним относят проблемы со свертываемостью крови, аллергическую реакцию на анестетики, сердечную недостаточность высокой степени тяжести. Женщинам не проводят процедуру в случаях, если она угрожает беременности.

Показания для проведения гистологии

Главное показание — предположение о наличии злокачественного или доброкачественного новообразования в определенном органе. В таком случае гистологию применяют в качестве уточняющего исследования. Также процедура поможет следить за динамикой состояния, исключить метастазирование опухоли, оценить эффективность проведенного лечения.

Гистология выполняется при обнаружении доброкачественной опухоли, склонной к последующему злокачественному перерождению. Это могут быть кишечные полипы, которые не опасны сами по себе, но иногда становятся злокачественными новообразованиями из-за воздействия внешних факторов.

Часто гистологическое исследование требуется при неонкологических заболеваниях. В гастроэнтерологической и гинекологической практике обследование органов выполняется для исключения воспаления и оценки динамики состояния при обнаружении гормональных расстройств.

Значимость гистологии сложно переоценить при терапии иммунопатологических состояний. Она дает возможность определить выраженность патологии, степень повреждения тканей и эффективность используемых методов лечения. Цитологический вариант диагностики часто применяют в скрининге для обнаружения болезней на ранних стадиях, когда у пациента еще нет жалоб.

Процедура требуется после получения мазка-отпечатка в цервикальном канале у женщин для исключения дисплазии, повышающей риск формирования злокачественного новообразования. Также таким образом можно исключить наличие уже сформированного патологического очага.

Отсутствие противопоказаний дает возможность проводить исследование в большинстве случаев. Это нетравматичная простая процедура, редко вызывающая осложнения. Только в редких случаях пациенты жалуются на плохую переносимость обезболивающего средства или болезненность.

Тема 1.техника гистологического исследования

BOOK

Содержание
темы

1.1.Световая микроскопия

1.1.1.
Устройство микроскопа
1.1.2.
Приготовление гистологического препарата

1.1.2.1. Взятие и фиксация материала
1.1.2.2.Обезвоживание и
уплотнение материала
1.1.2.3.
Приготовление срезов
1.1.2.4.
Окрашивание препаратов и заключение в
консервирующую среду

1.1.3. Методы окрашивания гистологических
препаратов

1.1.3.1. Типы
красителей
1.1.3.2. Общие
методы окраски
1.1.3.3.
Выявление неклеточных структур соединительнойткани
1.1.3.4.
Окраска клеток соединительной ткани и крови
1.1.3.5.
Выявление элементов нервной системы

1.1.4.
Гистохимические методы исследования
1.1.5. Просмотр
препаратов

1.1.5.1.
Срез; окраска гематоксилин-эозином
1.1.5.2.
Тотальный препарат: окраска судан III —
гематоксилином
1.1.5.3.
Срез после декальцинации; окраска по Шморлю
1.1.5.4. Срез;
окраска по Маллори

1.2. Электронная микроскопия

1.2.1. Принцип работы электронного микроскопа

1.2.1.1.
Особенности: электронная волна,
электромагнитные «линзы»
1.2.1.2. Ход лучей

1.2.2. Особенности приготовления препарата

В гистологии, цитологии и
эмбриологии существует много методов
исследования.

Здесь рассматриваются
лишь те, которые связаны со световой и
электронной микроскопией мёртвых
(фиксированных) клеток и тканей.

1.1. Световая
микроскопия

1.1.1.
Устройство микроскопа

В микроскоп входят 3 системы — оптическая, осветительная и осветительная и механическая. 1.Оптическая системавключает объектив и окуляр. а)Объектив (1) — это система линз, вставляемая в тубус (2) снизу и непосредственно направляемая на объект (отсюда — и название). Обычные увеличения объектива: 8 , 8 , 20 , 40 (сухие объективы), 90 (иммерсионный объектив).	Схема — строение светового микроскопа. Полный размер
При использовании последнего объектива его следует погрузить в каплю кедрового (иммерсионного) масла, нанесённую на покровное стекло препарата. б) Окуляр (3) вставляется в тубус сверху. Применяются окуляры с увеличением 7, 7, 10, 15. в) Результирующее увеличение микроскопа — произведение увеличений объектива и окуляра, например: 20 10 = 200 раз. г)  Таким образом, функция оптической системы — формирование увеличенного изображения препарата на сетчатке глаза наблюдателя.
2.Осветительная система — источник света, зеркало, конденсор и диафрагма. а) Источник света (4) может быть встроен в микроскоп, а может находиться и вне микроскопа (пример — обычная настольная лампа). б) Зеркало (5) собирает лучи от источника и направляет их на препарат снизу.
Одна поверхность зеркала — плоская, вторая — вогнутая; последняя используется при искусственном освещении. в) Конденсор (6) состоит из линз, которые фокусируют лучи света на препарате. Поднимая и опуская конденсор (с помощью винта), можно настраивать фокусировку лучей. г) Диафрагма (7) вмонтирована в конденсор; это система непрозрачных пластинок с отверстием посередине. Она ограничивает световой поток, падающий на препарат. При использовании объективов с большим увеличением отверстие диафрагмы следует уменьшить — для ослабления сферической аберрации.
3. Механическая система — тубус (2), штатив (8), колонка (9) и предметный столик (10). а) С колонкой связаны макро- и микрометрический винты. Они поднимают и опускают тубус для фокусировки изображения объекта на сетчатке глаза наблюдателя.
Макровинт используется при работе на малом увеличении, а микровинт — на большом. б) Предметный столик может перемещаться в горизонтальной плоскости, что позволяет менять участки препарата, попадающие в поле зрения.
В итоге, световые лучи проходят следующий путь: источник света (4) источник света (4)зеркало (5)конденсор (6)диафрагма (7)диафрагма (7) препарат объектив (1)объектив (1)тубус (2)окуляр (3). Т.е. микроскопия ведётся в проходящем свете, для чего препарат должен быть достаточно тонким. Заметим также, что микроскоп даёт перевёрнутое изображение объекта.

1.1.2.
Приготовление гистологического препарата

1. По характеру взятого материала различают следующие виды гистологических препаратов: а) срезы органов (толщиной 5-15 нм), б) мазки (крови, костного мозга и т.д.) и отпечатки (напр., селезёнки), в) плёнки (брюшины, мягкой мозговой оболочки), или тотальные препараты Чаще всего используются срезы. 2. Приготовление препарата обычно включает 4 следующих этапа: а) взятие и фиксация материала, б) обезвоживание и уплотнение материала, в) приготовление срезов, г) окрашивание препаратов и заключение в консервирующую среду.

1.1.2.1.
Взятие и фиксация материала

1. Из соответствующего органа вырезают небольшие кусочки (0,5 x 1 x 1 см) и погружают их в фиксатор (формалин, метанол и т.д.) — обычно на 24 ч. 2. Фиксация производится для предупреждения процессов аутолиза (самопереваривания) тканей. Это достигается путём денатурации (коагуляции) белков. 3. После фиксации образцы промывают проточной водой в течение нескольких часов.

1.1.2.2.
Обезвоживание и уплотнение материала

1.1.2.3.
Приготовление срезов

1.1.2.4. Окрашивание
препаратов и заключение в консервирующую среду

1. Перед окрашиванием образцы освобождают от парафина, проводя по батарее растворителей: ксилол, спирт 100 %, 96 %, 80 %, 70 %, 60 %, вода (по 2-5 мин) (Этот ряд кончается водой в том случае, если затем используется водорастворимый краситель.) 2. Для окрашивания предметные стёкла со срезами помещают на короткое время в раствор красителя, промывают водой, обрабатывают раствором другого красителя (если таковой используется тоже) и вновь промывают водой. 3. Препарат опять обезвоживают(проводя по батарее спиртов с возрастающей концентрацией), а затем просветляют(в карбол-ксилоле и ксилоле) — для удаления лишней краски. 4. Наконец, на препарат наносят каплю канадского бальзама (в случае среза) или кедрового масла (на мазки крови) и накрывают покровным стеклом.

1.1.2.5. Мазки и
тотальные препараты: особенности приготовления

В остальных же
случаях (т.е. при получении срезов) приготовление
гистологического препарата — весьма долгая и
трудоёмкая процедура.
Но при правильном её выполнении
полученный препарат может храниться
неопределённо долгое время.

1.1.3.
Методы окрашивания гистологических препаратов

1.1.3.1.
Типы красителей

Все красители,
используемые в гистологической технике,
подразделяются на 3 типа.-

Существует большое
количество различных способов окраски.
Те из них, которые встречаются в нашем курсе,
перечислены ниже.

1.1.3.2. Общие методы
окраски

1.1.3.3. Выявление
неклеточных структур соединительной ткани

1. Окраска по методу ван Гизона	а) Краситель — смесь растворов пикриновой кислоты и кислого фуксина. б) Коллагеновые волокна (содержащиеся в межклеточном веществе соединительной ткани) окрашиваются в ярко-красный цвет, а элементы других тканей (напр., мышечные волокна) — вжёлтый цвет.
2. Окраска по методу Маллори	1. Краситель является трёхцветным: это смесь кислого фуксина, кислого фуксина, анилинового синего, оранжевогo G, а также двух кислот. 2.а) Коллагеновые волокна соединительной ткани окрашиваются в тёмно-синий цвет; б) многие другие структуры (ядра, мышечные волокна,эритроциты) — в оранжевыйили красный цвет.
3.Импрегнация серебром	1. а) Препарат обрабатывают аммиачным раствором серебра, а затем — восстановителями. б) В итоге, выделяющееся серебро осаждается на определённых волокнах соединительной ткани. – 2. Ретикулярные (аргирофильные) волокна приобретают чёрный цвет, коллагеновые волокна —коричневый, коллагеновые волокна —коричневый, ядра клеток — светло-коричневый.
4. Окраска орсеином	Эластические волокна соединительной ткани окрашиваются в тёмно-красный цвет; остальные структуры — в слабо-розовыйцвет.
5. Окраска гематоксилин- пикрофуксином	Эластические волокна окрашиваются пикриновой кислотой в жёлтый цвет, коллагеновые волокна — в красный цвет, ядра клеток — окрашиваются гематоксилином в тёмно-фиолетовый цвет.
6. Окраска по методу Шморля	1. Используется для окраски костей и дентина. 2. а) Предварительно кусочки материала подвергают декальцинации (с помощью кислоты), подвергают декальцинации (с помощью кислоты), а затем выдерживают в растворе алюмокалиевых квасцов. б) Краситель — раствор тионина. 3. а) Стенки костных полостей и канальцев (выстланные сетью коллагеновых волокон) окрашиваются в тёмно-коричневый цвет; б) остальной фон — светло-коричневый.

1.1.3.4. Окраска клеток
соединительной ткани и крови

1.1.3.5. Выявление
элементов нервной системы

1.1.4.
Гистохимические методы исследования

а) Гистохимические
методы основаны на
специфической реакции
между химическим реактивом и определённым
компонентом препарата.
б) Образующийся
продукт реакции имеет окраску, отличную от
окраски исходного реактива.

1а) РНК	Реакция Браше. 1. Реактив (как отмечалось, — смесь двух красителей: метилового зелёного и пиронина. 2. а) А. Пиронин специфически окрашивает РНК вкрасный цвет. Б. Поэтому на препарате ядрышки (в составе ядра) и рибосомбогатые участки цитоплазмы имеют красный цвет. б) Другие структуры ядра (помимо ядрышек) — зелёные. 3. Обычно делают и контрольный препарат, который перед окрашиванием обрабатывают рибонуклеазой.
1б) ДНК	Реакция Фёльгена. 1. Основной реактив — фуксинсернистая кислота (реактив Шиффа). 2.ДНК-содержащие структуры окрашиваются в пурпурно-красный цвет.
2. Белки	Используются различные реакции; в том числе: а) с бромфеноловым синим (у белков — тёмно-фиолетовая окраска); б) со смесью нингидрин-реактив Шиффа (белки приобретают красный цвет).
3а) Полисахариды	ШИК-реакция. 1. Реактив — Шифф-периодная кислота (выделенные буквы и составляют аббревиатуру ШИК). 2. Периодат способствует образованию в субстрате альдегидной группы, которая взаимодействует с реактивом Шиффа. 3. На препарате ШИК-положительные компоненты (например, гранулы гликогена) имеют тёмно-красныйцвет.
3б) Гликозамин- гликаны	Реакция с толуидиновым синим. 1. При взаимодействии толуидинового синего с веществами, содержащими много кислотных групп, наблюдается метахромазия — изменение окраски с синей на фиолетовую и красную. 2. Подобным свойством обладают, в частности, компоненты аморфного вещества соединительной ткани — гликозамингликаны (являющиеся, как известно, гетерополисахаридами с высоким содержанием кислотных радикалов).
4. Нейтральный жир	Реакция с суданом III(о которой уже упоминалось). Капли жира в жировой клетке окрашиваются в яркий оранжево-красный цвет благодаря растворению в них красителя.

1.1.5. Просмотр
препаратов

1.1.5.1. Срез; окраска
гематоксилин-эозином

1.1.5.2. Тотальный
препарат: окраска судан III — гематоксилином

1.1.5.3. Срез после
декальцинации; окраска по Шморлю

1.1.5.4. Срез; окраска
по Маллори

1.2. Электронная
микроскопия

Если в световом микроскопе
увеличение составляет 100-1000 раз,
то в электронном микроскопе — 10.000 –100.000 раз (и
выше), т.е. примерно в 100 раз
больше.

1.2.1. Принцип
работы электронного микроскопа

1.2.1.1. Особенности:
электронная волна, электромагнитные «линзы»

1.2.1.2. Ход лучей

Ход лучей в электронном микроскопе, в принципе, таков же, как в световом.- 1. а) Источником электронов служиткатод (1), а движущей силой — разность потенциалов между катодом и анодом (2). б) Анод расположен вблизи катода и имеет отверстие посередине, через которое проскакивают электроны. в) Чтобы их поток далее не ослабевал, в тубусе микроскопа создаётся высокий вакуум.	Схема — ход лучей в световом (I) и электронном (II) микроскопе. Полный размер
2. а) Одна электромагнитная катушка (3) служит в качестве конденсора (фокусирует пучки на образце (4)), б) вторая катушка (5) — в качестве объектива (принимает лучи, расходящиеся от образца), в) а третья катушка (6) — в качестве окуляра, или проекционной линзы.
3. Лучи, проходящие через последнюю катушку, попадают далее на люминесцентный экран (7) и вызывают его свечение в месте падения электронов.

1.2.2. Особенности
приготовления препарата

1. Взятие материала и фиксация	Материал берут очень маленькими кусочками (порядка 1 мм 3 ), а фиксацию осуществляют обычно в 2 стадии: вначале глутаральдегидом (стабилизация белков), затем — четырёхокисью осмия (стабилизация фосфолипидов и контрастирование ткани).
2. Уплотнение материала	1. Образцы, как обычно, обезвоживают, а для их дальнейшего уплотнения используют эпоксидные смолы . 2. а) Заливку производят в специальных формах, б) затвердевание смеси происходит путём её полимеризации в термостате, в) и затвердевшие блоки имеют вид маленьких свечей.
3. Приготовление срезов	1. Срез делают с помощью ультратома; их толщина — 30-50 нм (ср. с микротомными срезами —10.000 – 20.000 нм). 2. Затем их переносят на сеточки (играющие роль предметного стекла).
4. Окрашивание срезов	1. а) Окрашивание срезов сводится к их контрастированию с помощью солей тяжёлых металлов (свинца, вольфрама, урана). б) Эти соли осаждаются на фосфолипидах мембран и поглощают электроны. 2.Поэтому соответствующие места клетки выглядят более тёмными.

Технические аспекты

Описаны многочисленные способы забора адекватного количества биопсийного материала. Чаще всего используется щипковая биопсия выполняемая с помощью биопсийных щипцов. Множественная биопсия повышает диагностическую ценность исследования. Важны и такие аспекты, как размер кусочков, место забора, ориентация, фиксация и окрашивание препаратов.

При щипковом методе в биоптат обычно попадает только слизистая оболочка. Иногда крупные биопсийные щипцы захватывают и подслизистый слой. Тем не менее, таким щипцам требуется биопсийный канал не менее 3,6 мм в диаметре, при этом обычно забираемый ими материал бывает в 2-3 раза крупнее по поверхности, но не в глубину.

Цитологическое исследование препаратов, получаемых при щеточной биопсии может быть полезным дополнением к щипковой биопсии в диагностике ряда злокачественных и инфекционных процессов. Петлевая эксцизия применяется для удаления крупных полипов. Комбинация технических приемов может повысить диагностические возможности.

Аспирационная биопсия с помощью тонкой иглы под контролем эндоскопического ультразвукового исследования позволяет взять биопсию с субэпителиальных очагов, а также объектов, располагающихся вне желудочно-кишечного тракта (лимфоузлы, опухоли поджелудочной железы).

Толстая кишка

Визуализация патологического очага в толстом кишечнике обуславливает необходимость его патогистологической оценки. При слишком большом, для единовременного удаления, количестве полипов должен осуществляться забор репрезентативного количества кусочков.

Мельчайшие полипы, выявляемые при скрининговой сигмоскопии, должны подвергаться биопсии, более крупные полипы следует удалять целиком при последующей колоноскопии. Морфологическая констатация наличия аденомы или аденокарциномы должна служить поводом для исследования всей толстой кишки.

При колитах эндоскопическое исследование с биопсией помогает в установлении протяженности процесса, дифференциальной диагностике и планировании лечения. Биопсийное исследование в остром периоде у пациента с кровянистой диареей позволяет отличить самопроизвольно излечивающийся острый колит от первичной или рецидивной атаки хронического язвенного колита или ишемического колита.

Биопсия терминального отдела подвздошной кишки может быть полезной в диагностике болезни Крона, инфекционного илеита и лимфоидной нодулярной гиперплазии. Как болезнь Крона, так и язвенный колит связаны с повышенным риском развития колоректального рака.

При этих заболеваниях с целью выявления дисплазии рекомендуется проведение эндоскопического исследования через 8 лет после первичной диагностики, если процесс носил правосторонний характер. У пациентов с левосторонней локализацией патологических изменений угроза развития рака возрастает к 15 году от начала заболевания.

У больных с панколитом наиболее часто используемым подходом является 4-квадрантный забор материала через каждые 10 см (через 5 см на протяжении 25 см дистального отдела). При левостороннем колите биопсия из проксимальных отделов толстой кишки также должна выполняться для уточнения распространенности процесса.

Тактические подходы к очагам дисплазии у пациентов с хроническим колитом продолжают развиваться. Если участок слизистой оболочки с диспластическими изменениями крупный, с неровной поверхностью или сочетается со стриктурой, требуется хирургическое лечение.

Однако аденому типичного вида, развившуюся на участке толстой кишки с признаками хронического колита, следует удалить с забором биопсийного материала из соседних участков слизистой оболочки. Если аденоматозный полип удален целиком и в окружающей слизистой оболочке нет признаков дисплазии, можно считать что проведено адекватное лечебное мероприятие при доброкачественной спорадической аденоме и продолжать наблюдение за больным с повторными эндоскопическими исследованиями.

Остается неясным, сколько кусочков и в каком месте следует забирать при хронической диарее и эндоскопически нормальной толстой кишке. Диагноз микроскопического колита устанавливается после выявления соответствующих гистологических признаков у больных с хронической водной диареей, при наличии нормальной эндоскопической картины и отсутствии дисбиоза.

Тонкая кишка

Биопсия имеет важное значение в диагностике заболеваний тонкой кишки. Пероральный забор биопсийного материала традиционно осуществляется в области трейцевой связки. Эндоскопическая биопсия в настоящее время используется наиболее часто, так как позволяет за короткое время выполнить несколько прицельных биопсий в более комфортных для пациента условиях.

Объем кусочков, полученных при щипковой биопсии, обычно бывает достаточным для постановки диагноза при диффузных поражениях слизистой оболочки тонкой кишки, если берется не менее 3 биоптатов из участков дистальнее луковицы ДПК (для исключения неправильной интерпретации морфологической картины, связанной с бруннеровыми железами).

При заболеваниях с сегментарным характером поражения осуществляется забор нескольких биоптатов из более удаленных отделов тонкой кишки, что требует более длинного эндоскопа меньшего диаметра. Гистологическое исследование бывает полезным для установления диагноза даже при нормальной макроскопической картине.

Биопсия тонкой кишки является стандартным методом исследования для подтверждения диагноза синдрома мальабсорпции. При диагностике целиакии гистологическое исследование биоптатов тонкой кишки крайне необходимо даже при позитивном тесте на присутствие в крови эндомизиальных антител или тканевой трансглютаминазы. Биопсия должна выполняться до назначения лечения, поскольку вышеуказанные тесты могут быть ложно позитивными

Инфекционное поражение тонкой кишки также может быть установлено при гистологическом исследовании. Лямблии и ряд других протозойных возбудителей способны вызывать воспалительные изменения в слизистой оболочке тонкой кишки. Типирование зрелых взрослых возбудителей, их трофозоидов, либо промежуточных форм жизненного цикла в составе эпителия или на его поверхности может способствовать установлению точного диагноза.

У пациентов с иммунодефицитными состояниями (пострансплантационная болезнь, ВИЧ-инфекция) в биоптатах тонкой кишки могут выявляться такие возбудители, как Isospora belli, Cryptosporidia, Cyclospora и Microsporidia. Другими возбудителями, выявляемыми в тонкой кишке при иммунодефицитных состояниях, являются цитомегаловирус, грибы рода Candida, гистоплазмы и Mycobacterium avium-intracellulare complex.

При заборе материала у таких пациентов бывает полезным применение биoпсийных щипцов крупного размера. Рекомендуется также применять щипцы без иглы-фиксатора для исключения механического повреждения слизистой оболочки и потери эксудата на ее поверхности.

Заключение

Забор биопсийного материала необходимо осуществлять для проведения дифференциальной морфологической диагностики между злокачественными, воспалительными и инфекционными процессами. Технические варианты включают щипковую биопсию, щеточную цитологию, петлевую эксцизию и аспирационную биопсию.

При злокачественных поражениях наиболее диагностически эффективным является забор 8-10 кусочков. Пациенты с пищеводом Барретта для выявления дисплазии должны проходить повторные эндоскопические исследования с биопсией. У больных с пищеводом Барретта и дисплазией тяжелой степени забор материала для выявления аденокарциномы должен выполняться из четырех квадрантов через каждые 1-2 см.

Эндоскопическая резекция слизистой может использоваться для удаления злокачественных или предраковых патологических очагов слизистой оболочки. Инфекционные заболевания требуют множественных биопсий, а при наличии язв кусочки должны браться как из краев, так и из центра дефектов.

Щеточная цитология и получение культуры вирусов являются вспомогательными методами. Инфекция Нр может быть диагностирована путем взятия биопсии из желудка с последующим гистологическим исследованием или проведением быстрого уреазного теста. Забор материала из угла желудка дает наибольший процент выявления Нр у больных с нелеченой инфекцией, но у пролеченных пациентов или лиц принимающих ингибиторы протонной помпы либо антибиотики биопсию следует проводить из слизистой оболочки тела и дна желудка.

Полипы желудка должны подвергаться биопсии, либо, при возможности, удаляться. Удаление полипов желудка связанно с более высоким риском кровотечения, чем полипэктомия из толстой кишки, что ставит вопрос о проведении пост операционной антисекреторной терапии.

Забор множественных биоптатов из тонкой кишки показан при обследовании лиц с диареей, целиакией или инфекцией. Аденомы ДПК могут носить спорадический характер или быть ассоциированными с семейным аденоматозным полипозом и должны по возможности удаляться.

Патологические очаги в толстой кишке должны удаляться во время эндоскопического исследования (полипэктомия, эндоскопическая резекция патологически измененного участка слизистой оболочки) или подвергаться биопсии, если они множественные или их удаление технически не возможно.

У пациентов с острым колитом биопсия может помочь установить этиологию заболевания. Пациенты с длительно существующим хроническим колитом подлежат систематическому наблюдению для выявления дисплазии, которая может быть ассоциирована с высоким риском развития рака.