Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт

Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт Для дачи

Гистология: что это за анализ?

Взятие биологического материала и его тщательный гистологический анализ очень значимы во многих отраслях медицины. С целью выявления патологии может назначаться, например, гистология родинки, шейки матки, органов пищеварительного тракта, эндокринной системы и так далее. На наши вопросы о гистологии ответил врач — онколог-маммолог «Клиники Эксперт» Воронеж Сергей Викторович Ежов.

— Сергей Викторович, расскажите, что это за анализ — гистология? В чём его суть?

 — Гистологический анализ — это высокоточный метод исследования, позволяющий определить патологическое отклонение в строении ткани. Данный метод используется во многих областях медицины, но его основная суть заключается в том, что с помощью этого метода можно диагностировать наличие злокачественных образований, определить их структуру, а также стадию патологического процесса.

— Что может являться биоматериалом для гистологического исследования?

— Биоматериалом может служить та или иная подозрительная ткань (кожа, слизистая оболочка, мышца, кость), взятая при помощи биопсии, либо препарат, полученный в результате хирургического вмешательства.

— Когда назначается гистология?

— Как я уже говорил, гистологическое исследование может применяться во многих направлениях медицины, но особенная его ценность заключается в определении природы и характера изменений в ткани при малейшем подозрении на онкологический процесс. Также это исследование проводят перед назначением противоопухолевой терапии для разработки плана лечения и во время лечения с целью контроля его эффективности.

— Что показывает гистология?

— Гистологический анализ даёт возможность обнаружить воспалительные процессы в ткани, установить природу того или иного новообразования (т. е. доброкачественное оно или злокачественное), определить уровень злокачественности, а также выявить локализацию первичного опухолевого очага. Надо понимать, что расшифровкой результатов гистологического исследования должен заниматься только специалист. Я бы не рекомендовал пациентам делать это самостоятельно.

Биопсия

— Как сдать анализ на гистологию? Нужна ли специальная подготовка?

— Перед тем, как провести гистологическое исследование, необходимо выполнить биопсию и отправить полученный при этом материал (биоптат) на анализ. Как таковой подготовки биопсия не требует, существует лишь ряд ограничений и рекомендаций, которых нужно придерживаться пациенту накануне и во время забора биоптата. Важно поставить врача в известность обо всех принимаемых препаратах. Накануне исследования необходимо отказаться от лекарственных средств, влияющих на свёртываемость крови (по согласованию с доктором, назначившим их), а также сообщить врачу, который будет выполнять биопсию, о наличии аллергии. Нежелательно проведение данной манипуляции у женщин в дни менструации. Противопоказано употребление алкоголя.

— Как проводится гистология?

— Полученный при биопсии материал помещается в формалин и направляется на гистологическое исследование в патоморфологический центр. Там материал заливается парафином (чаще всего). После остывания, отвердевания делаются тонкие срезы, на которые наносятся различные реактивы для детального изучения ткани под микроскопом врачом-патоморфологом.

— Сколько делается гистологический анализ?

— Если результат очевидный и не вызывает сомнений, выдача заключения производится в среднем через 7-10 дней. При возникающих сомнениях, подозрениях в точности поставленного диагноза препарат могут изучать дольше.

— Бывают ли ошибки в результатах гистологии?

— К сожалению, особенно в небольших населённых пунктах, могут возникать проблемы с качеством проведения гистологического анализа. Это связано с разными причинами (отсутствие врачей, оборудования, расходных материалов). Но в случае появления сомнений в правильности гистологического заключения обычно назначается пересмотр готовых препаратов в другом патоморфологическом центре.

Хотите больше узнать о других видах анализов? Читайте статьи в нашей рубрике
Записаться на приём к онкологу можно здесь
ВНИМАНИЕ: услуга доступна не во всех городах

Беседовала Марина Воловик

Редакция рекомендует:

Предрак: бояться или не обращать внимания?
У страха глаза велики. Так ли опасна миома?
Рак груди — не приговор!

Для справки:

Ежов Сергей Викторович

В 2007 году окончил лечебный факультет Курского государственного медицинского университета.

2007 — 2009 гг. — клиническая ординатура по специальности «Онкология» в Медицинском радиологическом научном центре РАМН г. Обнинск (сегодня — МРНЦ им. А.Ф. Цыба — филиал ФГБУ «НМИЦ радиологии» Минздрава России).

В настоящее время — врач — онколог-маммолог в «Клинике Эксперт» Воронеж.

Приём ведёт по адресу: ул. Пушкинская, 11.

«Вырезка» и «фиксация»

Далее родинку внимательно осмотрят, опишут в протоколе и поместят особым образом в специальную пластиковую кассету для дальнейшего процесса. Весь процесс фиксируют на цифровую камеру. Видео понадобится в случаях неправильного расположения части родинки в кассете, когда нужно будет вернуться к этому этапу и переориентировать фрагмент.

Из промаркированного контейнера с транспортной средой извлекают родинку (невус):

Далее пигментное образование разделяют на несколько частей таким образом, чтобы для гистологического исследования были доступны все участки образования. Здесь все нужно сделать правильно, чтобы точно определить толщину меланомы по Бреслоу, состояние краев резекции кожи с опухолью – эти параметры имеют решающее значение в оценке адекватности операции и в прогнозе заболевания.

На кассете с родинкой пишут фамилию и инициалы пациента, которые были указаны на контейнере, а также QR-код и персональный числовой код.

Фрагменты размещают в кассете параллельно плоскости ее дна, как показано на картинке ниже. Если фрагмент положить перпендикулярно плоскости кассеты – это может затруднить оценку краев резекции, т. е. полноты удаления родинки или меланомы.

На правильном размещении фрагментов в кассете остановимся подробнее. Это очень важный момент, который позволяет избежать неинформативных срезов в будущем.

Чтобы исключить подобные ошибки, в процессе исследования используют автоматизированное оборудование.

После того как фрагмент уложат правильно, кассету плотно закрывают, что исключает утрату кусочков и переориентацию на последующем этапе 18–24-часовой фиксации операционного материала в специальном растворе (формалине).

Изучение препарата врачом-патоморфологом

Наконец родинка (невус) готова к изучению под микроскопом.

В современной лаборатории, такой как НЦКМД, на этом этапе также используются современные и высокие технологии. Но есть два момента, на которые, на мой взгляд, стоит обратить особое внимание.

Морфометрия

С помощью адаптера для микроскопа и специализированной программы врач-патоморфолог на экране компьютера измеряет параметры удаленной родинки в микрометрах (микронах).

Мне, как дерматоонкологу, это особенно важно для последующих измерений, к примеру, толщины по Бреслоу в случаях меланомы, а также расстояний от края опухоли до края резекции.

На картинках ниже примеры программного измерения различных участков препарата невуса кожи:

Коллегиальное мнение

До недавнего времени я не знал, что все заключения НЦКМД с диагнозом «злокачественная опухоль» выходят с подписью нескольких морфологов. Такой подход мне нравится и лишний раз подтверждает, что я не ошибся с выбором лаборатории.

Удаленные консультации

Благодаря передаче изображений препаратов на компьютер, открываются широкие возможности. На картинке ниже – специальный сканер гистологических препаратов VisionTek:

Он позволяет врачам-патоморфологам:

  1. Сканировать препараты в высоком разрешении, пересылать с помощью IT-технологий в другой город или страну, обсуждая результаты исследований с коллегами в нашей стране и за рубежом.
  1. Проводить презентации, клинические разборы и обучение, в том числе и телеконференции.
  1. Сохранять большое число изображений препаратов, которые не требуют физического места для хранения

Как проходит исследование

Лабораторное гистологическое исследование биопсийного материала проводят традиционным и ускоренным способом. Традиционно биоматериал проходит специальную обработку для сохранения формы. Его уплотняют и нарезают на пластины толщиной в несколько микронов для исследования под микроскопом. Результат можно получить в течение 7–10 дней.

Ускоренный способ применяют в случаях, когда биопсию проводят во время операции. Онкохирургу нужен результат исследования, чтобы определить – сохранять ткани или удалять их. В этом случае биообразец в течение 1 часа замораживают, разделяют и микроскопируют.


В онкологии применяют несколько видов микроскопирования:

  • световое – изучение биообразца в видимой части спектра;
  • ультрафиолетовое – изучение в ультрафиолетовой части спектра;
  • электронное – исследование под направленным пучком электронов;
  • флуоресцентное – исследование при флуоресцентном освещении после предварительного окрашивания биообразца;
  • интерференционное – определение концентрации и количественных показателей вещества в клетках;
  • цитоспектрофотометрию – исследование химического состава;
  • радиоавтографию – изотопную оценку активности обменных процессов.

В заключении специалист подробно описывает свойства всех видов тканей, которые были обнаружены в биообразце. Расшифровать результаты гистологии может только квалифицированный врач-онколог.

Методы гистологического исследования

Основной метод забора биоматериала из внутренних органов – биопсия. Ее проводят несколькими методами.

  • Пункционный. Распространенный метод для получения биообразцов тканей печени, простаты, молочных желез. Заключается во введении в орган тонкой биопсийной иглы.
  • Щипковый. Используют микроскопические щипцы, которые вводят эндоскопическим методом (бронхоскопия, колоноскопия, гастроскопия). Применяют при опухолях кишечника, пищевода, желудка, органов дыхания.
  • Аспирационный. Посредством тонкой трубочки отсасывают секреторную жидкость желез, миоматозных узлов матки.
  • Кюретаж. Применяют при исследовании полостей. Биоматериал соскабливают с поверхности посредством ложечки – кюреты.
  • Мазок. Используется для диагностики опухолей, расположенных на слизистых оболочках. Забор проводят миниатюрной щеткой.
  • Эксцизионный и инцизионный. Хирургическими инструментами иссекают часть или всю опухоль с последующим исследованием.

Биопсия в диагностике рака

Специальной подготовки к гистологии не требуется. Забор биоматериала проводят натощак, чаще всего утром. Процедура проходит под местным наркозом, поэтому не вызывает болезненных ощущений. Если новообразование расположено в кожных покровах, достаточно седативных (успокаивающих) средств.


Все методы биопсии абсолютно безопасны для организма и связаны с минимальным травматизмом. Проводят процедуру под визуальным контролем врача посредством УЗИ, что исключает риск повредить органы.

Преимуществом биопсии является минимальное количество противопоказаний. К ним относят проблемы со свертываемостью крови, аллергическую реакцию на анестетики, сердечную недостаточность высокой степени тяжести. Женщинам не проводят процедуру в случаях, если она угрожает беременности.

Показания для проведения гистологии

Главное показание — предположение о наличии злокачественного или доброкачественного новообразования в определенном органе. В таком случае гистологию применяют в качестве уточняющего исследования. Также процедура поможет следить за динамикой состояния, исключить метастазирование опухоли, оценить эффективность проведенного лечения.

Гистология выполняется при обнаружении доброкачественной опухоли, склонной к последующему злокачественному перерождению. Это могут быть кишечные полипы, которые не опасны сами по себе, но иногда становятся злокачественными новообразованиями из-за воздействия внешних факторов.

Часто гистологическое исследование требуется при неонкологических заболеваниях. В гастроэнтерологической и гинекологической практике обследование органов выполняется для исключения воспаления и оценки динамики состояния при обнаружении гормональных расстройств.

Значимость гистологии сложно переоценить при терапии иммунопатологических состояний. Она дает возможность определить выраженность патологии, степень повреждения тканей и эффективность используемых методов лечения. Цитологический вариант диагностики часто применяют в скрининге для обнаружения болезней на ранних стадиях, когда у пациента еще нет жалоб.

Процедура требуется после получения мазка-отпечатка в цервикальном канале у женщин для исключения дисплазии, повышающей риск формирования злокачественного новообразования. Также таким образом можно исключить наличие уже сформированного патологического очага.

Отсутствие противопоказаний дает возможность проводить исследование в большинстве случаев. Это нетравматичная простая процедура, редко вызывающая осложнения. Только в редких случаях пациенты жалуются на плохую переносимость обезболивающего средства или болезненность.

Тема 1.техника гистологического исследования

Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт

BOOK

Содержание
темы

1.1.Световая микроскопия

1.1.1.
Устройство микроскопа
1.1.2.
Приготовление гистологического препарата

1.1.2.1. Взятие и фиксация материала
1.1.2.2.Обезвоживание и
уплотнение материала
1.1.2.3.
Приготовление срезов
1.1.2.4.
Окрашивание препаратов и заключение в
консервирующую среду

1.1.3. Методы окрашивания гистологических
препаратов

1.1.3.1. Типы
красителей
1.1.3.2. Общие
методы окраски
1.1.3.3.
Выявление неклеточных структур соединительной
ткани
1.1.3.4.
Окраска клеток соединительной ткани и крови
1.1.3.5.
Выявление элементов нервной системы

1.1.4.
Гистохимические методы исследования
1.1.5. Просмотр
препаратов

1.1.5.1.
Срез; окраска гематоксилин-эозином
1.1.5.2.
Тотальный препарат: окраска судан III —
гематоксилином
1.1.5.3.
Срез после декальцинации; окраска по Шморлю
1.1.5.4. Срез;
окраска по Маллори

1.2. Электронная микроскопия

1.2.1. Принцип работы электронного микроскопа

1.2.1.1.
Особенности: электронная волна,
электромагнитные «линзы»
1.2.1.2. Ход лучей

1.2.2. Особенности приготовления препарата

Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт

В гистологии, цитологии и
эмбриологии существует много методов
исследования.

Здесь рассматриваются
лишь те, которые связаны со световой и
электронной микроскопией мёртвых
(фиксированных) клеток и тканей
.

Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт

1.1. Световая
микроскопия

Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт

1.1.1.
Устройство микроскопа

В микроскоп входят 3
системы —

Гистология: что это за анализ? | Клиника Экспертоптическая,
Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт
осветительная и
Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт
осветительная и
Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт
механическая.

1.Оптическая системавключает
объектив и окуляр.

а)Объектив
(1)
— это система линз,
вставляемая в
тубус (2) снизу и непосредственно
направляемая на объект (отсюда — и название).

Гистология: что это за анализ? | Клиника ЭкспертОбычные увеличения
объектива:

Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт 8 , Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт 8 , Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт 20 , Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт 40 (сухие объективы),

Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт90
(иммерсионный объектив).

Схема
— строение светового микроскопа.

Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт

Полный размер

При
использовании последнего объектива его следует
погрузить в каплю кедрового (иммерсионного)
масла, нанесённую на покровное стекло препарата.

б) Окуляр (3) вставляется в тубус сверху.
Применяются окуляры с увеличением
Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт 7, Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт 7, Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт 10, Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт 15.

в) Результирующее
увеличение микроскопа — произведение увеличений
объектива и окуляра, например:

20 Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт 10 = 200 раз.

г)  Таким образом,
функция оптической системы —

Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт формирование увеличенного
изображения препарата на сетчатке глаза
наблюдателя.

2.Осветительная система — источник света, зеркало,
конденсор и диафрагма.

а)
Источник света (4) может быть встроен в микроскоп, а
может находиться и вне микроскопа (пример —
обычная настольная лампа).

б) Зеркало
(5)
собирает лучи от
источника и направляет их на препарат снизу.

Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт

Гистология: что это за анализ? | Клиника ЭкспертОдна поверхность
зеркала — плоская, вторая — вогнутая;
Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт
последняя используется при
искусственном освещении.

в) Конденсор
(6)
состоит из линз,
которые фокусируют лучи света на препарате.
Поднимая и опуская конденсор (с помощью винта),
можно настраивать фокусировку лучей.

г) Диафрагма
(7)
вмонтирована в
конденсор; это система непрозрачных пластинок с
отверстием посередине.

Гистология: что это за анализ? | Клиника ЭкспертОна ограничивает
световой поток, падающий на препарат.
Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт
При использовании объективов с
большим увеличением отверстие диафрагмы следует
уменьшить — для ослабления сферической
аберрации.

3. Механическая
система
тубус (2), штатив (8), колонка (9)
и
предметный столик (10).

а) С
колонкой связаны макро- и микрометрический винты
.

Они поднимают
и опускают тубус для фокусировки изображения
объекта на сетчатке глаза наблюдателя.

Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт

Гистология: что это за анализ? | Клиника ЭкспертМакровинт
используется при работе на малом увеличении,
Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт
а микровинт — на большом.

б) Предметный столик может
перемещаться в горизонтальной плоскости, что
позволяет менять участки препарата, попадающие в
поле зрения.

В итоге,
световые лучи проходят следующий путь:

Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт источник света (4)Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт источник света (4)Гистология: что это за анализ? | Клиника Экспертзеркало (5)Гистология: что это за анализ? | Клиника Экспертконденсор
(6)
Гистология: что это за анализ? | Клиника Экспертдиафрагма (7)Гистология: что это за анализ? | Клиника Экспертдиафрагма (7)Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт
препарат Гистология: что это за анализ? | Клиника Экспертобъектив (1)Гистология: что это за анализ? | Клиника Экспертобъектив (1)Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт
тубус (2)Гистология: что это за анализ? | Клиника Экспертокуляр (3).

Т.е. микроскопия ведётся в проходящем свете, для чего препарат должен быть
достаточно тонким.
Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт
Заметим также, что микроскоп даёт перевёрнутое изображение объекта.

Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт

1.1.2.
Приготовление гистологического препарата

1. По характеру
взятого материала различают следующие виды
гистологических препаратов:

а) срезы органов (толщиной
5-15 нм),
б) мазки (крови, костного мозга и т.д.) и отпечатки (напр., селезёнки),
в) плёнки (брюшины, мягкой мозговой
оболочки), или
тотальные
препараты

Чаще всего используются
срезы.

2.
Приготовление препарата обычно включает 4
следующих этапа:

а) взятие и фиксация материала,
б) обезвоживание и уплотнение материала,
в) приготовление срезов,
г) окрашивание препаратов и заключение в
консервирующую среду.

Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт

1.1.2.1.
Взятие и фиксация материала

1. Из соответствующего
органа вырезают небольшие кусочки (0,5

x 1 x 1
см) и погружают их в
фиксатор (формалин, метанол и т.д.) — обычно на 24 ч.

2. Фиксация производится для
предупреждения процессов аутолиза
(самопереваривания) тканей.
Это достигается путём
денатурации (коагуляции)
белков.

3. После фиксации образцы
промывают проточной водой в течение нескольких
часов.

Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт

1.1.2.2.
Обезвоживание и уплотнение материала

Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт

1.1.2.3.
Приготовление срезов

Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт

1.1.2.4. Окрашивание
препаратов и заключение в консервирующую среду

1. Перед окрашиванием
образцы
освобождают
от парафина
, проводя по
батарее растворителей:

Гистология: что это за анализ? | Клиника Экспертксилол,
спирт 100 %, 96 %, 80 %, 70 %, 60 %, вода (по 2-5 мин)

(Этот ряд кончается водой в
том случае, если затем используется
водорастворимый краситель.)

2. Для окрашивания
предметные стёкла со срезами

Гистология: что это за анализ? | Клиника Экспертпомещают на
короткое время
в
раствор красителя,

Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт
промывают водой,
Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт
обрабатывают раствором другого
красителя (если таковой используется тоже) и
Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт
вновь промывают водой.

3. Препарат
Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт
опять обезвоживают(проводя по батарее спиртов с
возрастающей концентрацией),
Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт
а затем просветляют(в карбол-ксилоле и ксилоле) —
для удаления лишней краски.

4. Наконец, на препарат
наносят каплю
канадского
бальзама
(в случае среза)
или
кедрового масла (на мазки крови) и накрывают
покровным стеклом.

Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт

1.1.2.5. Мазки и
тотальные препараты: особенности приготовления

Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт

Гистология: что это за анализ? | Клиника ЭкспертВ остальных же
случаях (т.е. при получении срезов) приготовление
гистологического препарата — весьма долгая и
трудоёмкая процедура.
Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт
Но при правильном её выполнении
полученный препарат может храниться
неопределённо долгое время.

Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт

1.1.3.
Методы окрашивания гистологических препаратов

Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт

1.1.3.1.
Типы красителей

Все красители,
используемые в гистологической технике,
подразделяются на 3 типа.-

Существует большое
количество различных способов окраски.
Те из них, которые встречаются в нашем курсе,
перечислены ниже.

Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт

1.1.3.2. Общие методы
окраски

Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт

1.1.3.3. Выявление
неклеточных структур соединительной ткани

1.
Окраска по методу ван Гизона

а)
Краситель — смесь растворов пикриновой кислоты и
кислого фуксина.

б) Коллагеновые волокна (содержащиеся в межклеточном
веществе соединительной ткани) окрашиваются
в ярко-красный цвет,
Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперта элементы других
тканей (напр., мышечные волокна) —
вжёлтый цвет.

2.
Окраска по методу Маллори

1. Краситель является трёхцветным: это
смесь

Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперткислого фуксина,
Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт
кислого фуксина,
Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт
анилинового синего,
Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт
оранжевогo G,

а также двух кислот.

2.а) Коллагеновые
волокна
соединительной
ткани окрашиваются
в тёмно-синий цвет;

б) многие
другие структуры (ядра, мышечные волокна,
эритроциты) — в оранжевыйили красный цвет.

3.Импрегнация

серебром

1. а) Препарат
обрабатывают аммиачным раствором серебра, а
затем — восстановителями.

б) В
итоге, выделяющееся серебро осаждается на
определённых волокнах соединительной ткани. –

2. Гистология: что это за анализ? | Клиника ЭкспертРетикулярные (аргирофильные) волокна
приобретают чёрный
цвет,
Гистология: что это за анализ? | Клиника Экспертколлагеновые волокна —коричневый,
Гистология: что это за анализ? | Клиника Экспертколлагеновые волокна —коричневый,
Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт
ядра
клеток —
светло-коричневый.

4.
Окраска орсеином

Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт
Эластические волокна
соединительной ткани окрашиваются в тёмно-красный цвет;

Гистология: что это за анализ? | Клиника Экспертостальные
структуры — в
слабо-розовыйцвет.

5.
Окраска
гематоксилин-
пикрофуксином

Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт Эластические
волокна
окрашиваются
пикриновой кислотой
в жёлтый цвет,

Гистология: что это за анализ? | Клиника Экспертколлагеновые
волокна —
в красный цвет,

Гистология: что это за анализ? | Клиника Экспертядра клеток — окрашиваются
гематоксилином
в
тёмно-фиолетовый цвет.

6. Окраска
по методу
Шморля

1.
Используется для окраски костей и дентина.

2. а) Предварительно кусочки
материала
Гистология: что это за анализ? | Клиника Экспертподвергают декальцинации (с помощью кислоты),
Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт
подвергают декальцинации (с помощью кислоты),
Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт
а затем выдерживают в растворе
алюмокалиевых квасцов.

б) Краситель
— раствор тионина.

3. а) Стенки костных
полостей и канальцев

(выстланные сетью коллагеновых волокон)
окрашиваются
в тёмно-коричневый цвет;

б) остальной фонсветло-коричневый.

Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт

1.1.3.4. Окраска клеток
соединительной ткани и крови

Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт

1.1.3.5. Выявление
элементов нервной системы

Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт

1.1.4.
Гистохимические методы исследования

а) Гистохимические
методы основаны
на
специфической реакции

между химическим реактивом и определённым
компонентом препарата.
б) Образующийся
продукт реакции имеет окраску, отличную от
окраски исходного реактива.

1а) РНК

Реакция
Браше.

1. Реактив (как отмечалось, — смесь двух
красителей:
метилового зелёного и пиронина.

2. а) А. Пиронин
специфически окрашивает
РНК вкрасный цвет.
Б. Поэтому на
препарате ядрышки (в составе ядра) и
рибосомбогатые участки цитоплазмы имеют
красный цвет.

б) Другие структуры ядра
(помимо ядрышек) —
зелёные.

3. Обычно
делают и контрольный препарат, который перед
окрашиванием обрабатывают рибонуклеазой.

1б) ДНК

Реакция
Фёльгена.

1. Основной реактив — фуксинсернистая
кислота (реактив Шиффа).

2.ДНК-содержащие
структуры
окрашиваются
в
пурпурно-красный
цвет
.

2. Белки

Используются
различные реакции; в том числе:

а) с бромфеноловым синим (у белков — тёмно-фиолетовая
окраска
);
б) со смесью
нингидрин-реактив Шиффа (белки приобретают
красный цвет).

3а)
Полисахариды

ШИК-реакция.

1.
Реактив —
Шифф-периодная кислота (выделенные буквы и
составляют аббревиатуру
ШИК).

2. Периодат
способствует образованию в субстрате
альдегидной группы, которая взаимодействует с
реактивом Шиффа.

3. На препарате
ШИК-положительные компоненты (например, гранулы
гликогена) имеют
тёмно-красныйцвет.

3б)
Гликозамин-
гликаны

Реакция с
толуидиновым синим.

1. При взаимодействии
толуидинового синего с веществами, содержащими
много кислотных групп, наблюдается
метахромазия

изменение
окраски с
синей на фиолетовую
и
красную.

2. Подобным
свойством обладают, в частности, компоненты
аморфного вещества соединительной ткани —
гликозамингликаны

(являющиеся, как известно, гетерополисахаридами с высоким
содержанием кислотных радикалов).

4.
Нейтральный
жир

Реакция с
суданом III
которой уже упоминалось).

Капли жира в жировой клетке
окрашиваются в яркий
оранжево-красный цвет благодаря растворению в них
красителя.

Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт

1.1.5. Просмотр
препаратов

Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт

1.1.5.1. Срез; окраска
гематоксилин-эозином

Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт

1.1.5.2. Тотальный
препарат: окраска судан III — гематоксилином

Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт

1.1.5.3. Срез после
декальцинации; окраска по Шморлю

Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт

1.1.5.4. Срез; окраска
по Маллори

Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт

1.2. Электронная
микроскопия

Если в световом микроскопе
увеличение составляет 100-1000 раз,
то в электронном микроскопе — 10.000 –100.000 раз (и
выше), т.е.
примерно в 100 раз
больше
.

Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт

1.2.1. Принцип
работы электронного микроскопа

Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт

1.2.1.1. Особенности:
электронная волна, электромагнитные «линзы»

Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт

1.2.1.2. Ход лучей

Ход лучей в
электронном микроскопе, в принципе, таков же, как
в световом.-

1. а) Источником электронов служиткатод (1),

а движущей силой — разность
потенциалов между катодом и
анодом
(2).

б) Анод расположен вблизи
катода и имеет отверстие посередине, через
которое проскакивают электроны.

в) Чтобы их поток далее не
ослабевал, в тубусе микроскопа создаётся
высокий вакуум.

Схема — ход
лучей в световом (I) и электронном (II) микроскопе.

Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт

Полный размер

2. а) Одна электромагнитная катушка (3) служит в качестве конденсора
(фокусирует пучки на
образце
(4)
),

б) вторая катушка
(5)
— в качестве объектива
(принимает лучи, расходящиеся от образца),

в) а третья катушка (6)
в качестве окуляра, или проекционной линзы.

3.
Лучи, проходящие через последнюю катушку,
попадают далее на
люминесцентный
экран (7)
и вызывают его
свечение в месте падения электронов.

Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт

1.2.2. Особенности
приготовления препарата

1. Взятие
материала и
фиксация
Материал
берут очень маленькими кусочками (порядка 1 мм
3 ),
а фиксацию осуществляют обычно в 2 стадии:

Гистология: что это за анализ? | Клиника Экспертвначале глутаральдегидом (стабилизация белков),

Гистология: что это за анализ? | Клиника Экспертзатем — четырёхокисью осмия (стабилизация фосфолипидов и
контрастирование ткани).

2.
Уплотнение материала

1. Образцы, как обычно, обезвоживают,
а для их дальнейшего уплотнения используют
эпоксидные смолы .

2. а) Заливку
производят в специальных формах,

б) затвердевание
смеси происходит
путём её полимеризации в термостате,

в) и
затвердевшие
блоки имеют
вид маленьких свечей
.

3.
Приготовление
срезов

1. Срез делают с помощью ультратома;
их толщина — 30-50 нм (ср. с
микротом
ными срезами 10.000 – 20.000 нм).

2. Затем их переносят на сеточки
(играющие роль предметного стекла).

4.
Окрашивание
срезов

1. а) Окрашивание срезов сводится к их
контрастированию с помощью солей тяжёлых
металлов (свинца, вольфрама, урана).

б)
Эти соли осаждаются на
фосфолипидах мембран и поглощают электроны.

2.Поэтому
соответствующие места клетки выглядят более
тёмными.

Гистология: что это за анализ? | Клиника Эксперт

Технические аспекты

Описаны многочисленные способы забора адекватного количества биопсийного материала. Чаще всего используется щипковая биопсия выполняемая с помощью биопсийных щипцов. Множественная биопсия повышает диагностическую ценность исследования. Важны и такие аспекты, как размер кусочков, место забора, ориентация, фиксация и окрашивание препаратов.

При щипковом методе в биоптат обычно попадает только слизистая оболочка. Иногда крупные биопсийные щипцы захватывают и подслизистый слой. Тем не менее, таким щипцам требуется биопсийный канал не менее 3,6 мм в диаметре, при этом обычно забираемый ими материал бывает в 2-3 раза крупнее по поверхности, но не в глубину.

Цитологическое исследование препаратов, получаемых при щеточной биопсии может быть полезным дополнением к щипковой биопсии в диагностике ряда злокачественных и инфекционных процессов. Петлевая эксцизия применяется для удаления крупных полипов. Комбинация технических приемов может повысить диагностические возможности.

Аспирационная биопсия с помощью тонкой иглы под контролем эндоскопического ультразвукового исследования позволяет взять биопсию с субэпителиальных очагов, а также объектов, располагающихся вне желудочно-кишечного тракта (лимфоузлы, опухоли поджелудочной железы).

Толстая кишка

Визуализация патологического очага в толстом кишечнике обуславливает необходимость его патогистологической оценки. При слишком большом, для единовременного удаления, количестве полипов должен осуществляться забор репрезентативного количества кусочков.

Мельчайшие полипы, выявляемые при скрининговой сигмоскопии, должны подвергаться биопсии, более крупные полипы следует удалять целиком при последующей колоноскопии. Морфологическая констатация наличия аденомы или аденокарциномы должна служить поводом для исследования всей толстой кишки.

При колитах эндоскопическое исследование с биопсией помогает в установлении протяженности процесса, дифференциальной диагностике и планировании лечения. Биопсийное исследование в остром периоде у пациента с кровянистой диареей позволяет отличить самопроизвольно излечивающийся острый колит от первичной или рецидивной атаки хронического язвенного колита или ишемического колита.

Биопсия терминального отдела подвздошной кишки может быть полезной в диагностике болезни Крона, инфекционного илеита и лимфоидной нодулярной гиперплазии. Как болезнь Крона, так и язвенный колит связаны с повышенным риском развития колоректального рака.

При этих заболеваниях с целью выявления дисплазии рекомендуется проведение эндоскопического исследования через 8 лет после первичной диагностики, если процесс носил правосторонний характер. У пациентов с левосторонней локализацией патологических изменений угроза развития рака возрастает к 15 году от начала заболевания.

У больных с панколитом наиболее часто используемым подходом является 4-квадрантный забор материала через каждые 10 см (через 5 см на протяжении 25 см дистального отдела). При левостороннем колите биопсия из проксимальных отделов толстой кишки также должна выполняться для уточнения распространенности процесса.

Тактические подходы к очагам дисплазии у пациентов с хроническим колитом продолжают развиваться. Если участок слизистой оболочки с диспластическими изменениями крупный, с неровной поверхностью или сочетается со стриктурой, требуется хирургическое лечение.

Однако аденому типичного вида, развившуюся на участке толстой кишки с признаками хронического колита, следует удалить с забором биопсийного материала из соседних участков слизистой оболочки. Если аденоматозный полип удален целиком и в окружающей слизистой оболочке нет признаков дисплазии, можно считать что проведено адекватное лечебное мероприятие при доброкачественной спорадической аденоме и продолжать наблюдение за больным с повторными эндоскопическими исследованиями.

Остается неясным, сколько кусочков и в каком месте следует забирать при хронической диарее и эндоскопически нормальной толстой кишке. Диагноз микроскопического колита устанавливается после выявления соответствующих гистологических признаков у больных с хронической водной диареей, при наличии нормальной эндоскопической картины и отсутствии дисбиоза.

Тонкая кишка

Биопсия имеет важное значение в диагностике заболеваний тонкой кишки. Пероральный забор биопсийного материала традиционно осуществляется в области трейцевой связки. Эндоскопическая биопсия в настоящее время используется наиболее часто, так как позволяет за короткое время выполнить несколько прицельных биопсий в более комфортных для пациента условиях.

Объем кусочков, полученных при щипковой биопсии, обычно бывает достаточным для постановки диагноза при диффузных поражениях слизистой оболочки тонкой кишки, если берется не менее 3 биоптатов из участков дистальнее луковицы ДПК (для исключения неправильной интерпретации морфологической картины, связанной с бруннеровыми железами).

При заболеваниях с сегментарным характером поражения осуществляется забор нескольких биоптатов из более удаленных отделов тонкой кишки, что требует более длинного эндоскопа меньшего диаметра. Гистологическое исследование бывает полезным для установления диагноза даже при нормальной макроскопической картине.

Биопсия тонкой кишки является стандартным методом исследования для подтверждения диагноза синдрома мальабсорпции. При диагностике целиакии гистологическое исследование биоптатов тонкой кишки крайне необходимо даже при позитивном тесте на присутствие в крови эндомизиальных антител или тканевой трансглютаминазы. Биопсия должна выполняться до назначения лечения, поскольку вышеуказанные тесты могут быть ложно позитивными

Инфекционное поражение тонкой кишки также может быть установлено при гистологическом исследовании. Лямблии и ряд других протозойных возбудителей способны вызывать воспалительные изменения в слизистой оболочке тонкой кишки. Типирование зрелых взрослых возбудителей, их трофозоидов, либо промежуточных форм жизненного цикла в составе эпителия или на его поверхности может способствовать установлению точного диагноза.

У пациентов с иммунодефицитными состояниями (пострансплантационная болезнь, ВИЧ-инфекция) в биоптатах тонкой кишки могут выявляться такие возбудители, как Isospora belli, Cryptosporidia, Cyclospora и Microsporidia. Другими возбудителями, выявляемыми в тонкой кишке при иммунодефицитных состояниях, являются цитомегаловирус, грибы рода Candida, гистоплазмы и Mycobacterium avium-intracellulare complex.

При заборе материала у таких пациентов бывает полезным применение биoпсийных щипцов крупного размера. Рекомендуется также применять щипцы без иглы-фиксатора для исключения механического повреждения слизистой оболочки и потери эксудата на ее поверхности.

Заключение

Забор биопсийного материала необходимо осуществлять для проведения дифференциальной морфологической диагностики между злокачественными, воспалительными и инфекционными процессами. Технические варианты включают щипковую биопсию, щеточную цитологию, петлевую эксцизию и аспирационную биопсию.

При злокачественных поражениях наиболее диагностически эффективным является забор 8-10 кусочков. Пациенты с пищеводом Барретта для выявления дисплазии должны проходить повторные эндоскопические исследования с биопсией. У больных с пищеводом Барретта и дисплазией тяжелой степени забор материала для выявления аденокарциномы должен выполняться из четырех квадрантов через каждые 1-2 см.

Эндоскопическая резекция слизистой может использоваться для удаления злокачественных или предраковых патологических очагов слизистой оболочки. Инфекционные заболевания требуют множественных биопсий, а при наличии язв кусочки должны браться как из краев, так и из центра дефектов.

Щеточная цитология и получение культуры вирусов являются вспомогательными методами. Инфекция Нр может быть диагностирована путем взятия биопсии из желудка с последующим гистологическим исследованием или проведением быстрого уреазного теста. Забор материала из угла желудка дает наибольший процент выявления Нр у больных с нелеченой инфекцией, но у пролеченных пациентов или лиц принимающих ингибиторы протонной помпы либо антибиотики биопсию следует проводить из слизистой оболочки тела и дна желудка.

Полипы желудка должны подвергаться биопсии, либо, при возможности, удаляться. Удаление полипов желудка связанно с более высоким риском кровотечения, чем полипэктомия из толстой кишки, что ставит вопрос о проведении пост операционной антисекреторной терапии.

Забор множественных биоптатов из тонкой кишки показан при обследовании лиц с диареей, целиакией или инфекцией. Аденомы ДПК могут носить спорадический характер или быть ассоциированными с семейным аденоматозным полипозом и должны по возможности удаляться.

Патологические очаги в толстой кишке должны удаляться во время эндоскопического исследования (полипэктомия, эндоскопическая резекция патологически измененного участка слизистой оболочки) или подвергаться биопсии, если они множественные или их удаление технически не возможно.

У пациентов с острым колитом биопсия может помочь установить этиологию заболевания. Пациенты с длительно существующим хроническим колитом подлежат систематическому наблюдению для выявления дисплазии, которая может быть ассоциирована с высоким риском развития рака.

Оцените статью
Дача-забор
Добавить комментарий