Как определить коронавирус или что такое метод полимеразной цепной реакции (ПЦР)?

ПЦР- мазки из носоглотки и ротоглотки для выявления РНК SARS-CoV-2

Коронавирус SARS-CoV-2, определение РНК, качественный анализ, в мазке со слизистой носоглотки и/или ротоглотки  — основной метод диагностики текущей инфекции.

Тестирование РНК SARS-CoV-2 в медицинских лабораториях не должно занимать более 48 часов с момента получения биологического материала. Если отбор проб происходит не на лабораторном объекте, следует учитывать время, затрачиваемое на доставку проб в лабораторию. Время, необходимое для проведения теста в референтной лаборатории, не должно превышать 48 часов с момента доставки образца.

Для выявления РНК SARS-CoV-2 с помощью ПЦР берется мазок:

• Любой человек с признаками острой респираторной инфекции;
• Пациенты с диагнозом внутрибольничной пневмонии;
• Люди, контактировавшие с пациентом с COVID-19, если симптомы не исключают COVID-19;
• Работники медицинских организаций, которые подвергаются воздействию инфекции во время своей трудовой деятельности, до появления IgG — 1 раз в неделю; если симптомы не исключают COVID-19 — немедленно;
• Лица, прибывшие в Российскую Федерацию из-за рубежа;
• Взрослые и дети из организованных групп — интернатов, детских домов, домов престарелых и т.д. и т.д. в случае респираторных симптомов.

Правила подготовки к процедуре забора мазка

Врач должен взять мазок из ротоглотки и носоглотки. Образцы мазков из ротоглотки и носоглотки объединяют в одной пробирке, чтобы выявить наличие более высоких концентраций вируса.

Пациенту за 3-4 часа до взятия мазка нельзя есть, пить, чистить зубы, полоскать рот и горло, использовать спрей-освежитель для ротовой полости, жевать жевательную резинку, курить. Кроме того, нельзя промывать нос, использовать спреи, капли, мази для носа. Это позволит сохранить для исследования максимально возможное число пораженных вирусом клеток эпителия (наружного слоя) верхних дыхательных путей.

Анализ результатов

Результат «обнаружен» указывает на наличие РНК-вируса в образце биоматериала пациента, т.е. на то, что человек заражен коронавирусом и заражает других.

Если тест положительный в лаборатории, результат сообщается как «первично положительный», и биоматериал направляется в референс-центр Роспотребнадзора для подтверждающего теста.

Результат первичного теста может быть подтвержден или не подтвержден в центре по направлению. Если результат первичного теста положительный, пациент должен самостоятельно принимать препарат до получения результатов подтверждающего теста. Результат «обнаружено» в подтверждающем тесте означает, что образец пациента был протестирован дважды и первоначальный положительный результат подтвержден дополнительным тестом в референс-центре. Если окончательный результат «обнаружено», заболевшему рекомендуется соблюдать режим самоисключения и обратиться к врачу.

«Не обнаружено» — Результат указывает на отсутствие РНК вируса в образце пациента, что означает отсутствие коронавируса в организме этого человека.

К сожалению, ПЦР-диагностика иногда дает неточные результаты. Ложноотрицательные результаты теста (у человека есть COVID-19, но результат теста отрицательный) могут иметь несколько различных причин.

• Количество вируса в образце ниже порога чувствительности тест-системы из-за неправильной подготовки пациента к тесту или из-за низкого количества вируса в организме (низкая вирусная нагрузка), например, при бессимптомном течении или во время выздоровления;
• Неправильное взятие мазка — например, только из глотки или только из носа, ошибки в технике взятия образца;
• Нарушение рекомендованного времени хранения собранного образца;
• Ненадежная система идентификации образца, приводящая к неправильному результату.

Исследование на антитела к коронавирусу

Иммунная система человека вырабатывает антитела, также известные как иммуноглобулины, в ответ на попадание в организм любого инфекционного агента, включая атипичную пневмонию (SARS-CoV-2).

Антитела класса М (IgM) к SARS-CoV-2 обычно начинают проявляться на 7-10 день после заражения. В организме человека они могут сохраняться до двух-трех месяцев. Таким образом, их обнаружение указывает на недавнюю или текущую инфекцию.

Антитела класса G (IgG) к SARS-CoV-2 обычно обнаруживаются через 10-14 дней после первого проявления болезни. Антитела IgG к COVID-19 являются признаком наличия коронавирусной инфекции или того, что она уже произошла у пациента. Пока неизвестно, как долго они сохраняются в организме.

Тестирование на антитела к S ARS-Cov-2 рекомендуется в следующих случаях:

• в качестве дополнительного метода диагностики острой инфекции (не ранее 7-го дня болезни для IgM, не ранее 10-14-го дня болезни для IgG) или при невозможности по какой-либо причине исследования мазков;
• для выявления лиц с бессимптомной формой инфекции;
• для установления факта перенесенной ранее инфекции при обследовании групп риска и проведении массового обследования населения для оценки уровня популяционного иммунитета;
• для отбора потенциальных доноров иммунокомпетентной (антиковидной) плазмы.

  Донорами могут быть лица в возрасте от 18 до 55 лет, не имеющие противопоказаний для сдачи крови (множественные хронические заболевания, беременность), которые были инфицированы коронавирусом и выздоровели при условии, что с момента начала заболевания прошло не менее пяти недель.

  На начало 2021 года в официальных источниках приводятся следующие показатели антител, считающиеся достаточными для донорства: IgG > 40 и IgM ≥ 1,5 или IgG > 80 и IgM ≥ 0. Решение о том, может ли человек стать донором антиковидной плазмы, принимает врач.

Отдельно стоит остановиться на оценке уровня иммунной защиты (формирования иммунитета) после вакцинации. В настоящее время понятно, что после коронавирусной инфекции в организме могут вырабатываться антитела (IgG) к ряду белков коронавируса. Так называемый N-белок коронавируса, который исследуется в большинстве лабораторий, является мишенью антител IgG, обнаруживаемых после болезни.

Для оценки иммунитета после вакцинации имеют значение (качественное) только специфические антитела IgG против белка-шипа SARS-CoV-2.

Этот тест выявляет наличие или отсутствие антител. При повторном проведении количественного теста стойкость иммунного ответа можно оценить по выработке этих антител. Тест на антитела к N-белку не является информативным для оценки поствакцинального иммунитета.

Объем сроки и кратность исследований при новой коронавирусной болезни COVID-19

Объем, сроки и кратность лабораторных исследований зависят от степени тяжести заболевания. Легкое течение заболевания с наблюдением пациента в амбулаторных условиях, как правило, не требует дополнительных лабораторных исследований. В случае среднетяжелого и тяжелого течения выполняются следующие исследования:

Клинический анализ крови: общий анализ крови, лейкемия, седиментация.

Биохимический анализ крови (мочевина, креатинин, калий/натрий/хлор, глюкоза, АлАт, АсАт, общий билирубин, альбумин, ферритин).

Рентгенологические методы диагностики (рентгенография грудной клетки и компьютерная томография без внутривенного контрастирования) используются для выявления COVID-19-индуцированной пневмонии, ее осложнений, дифференциальной диагностики с другими заболеваниями легких, а также для определения выраженности и динамики изменений и оценки эффективности проводимого лечения.

Компьютерная томография обладает высокой чувствительностью в выявлении поражений легких, характерных для COVID-19.

К Т следует использовать только при особых обстоятельствах и только после тщательного взвешивания пользы и риска.

Нельзя упускать из виду, что при компьютерной томографии пользователь подвергается облучению. Кроме того, существует вероятность того, что COVID 19 заразит кого-нибудь, пока он находится в отделении.

Ограничениями КТ по сравнению с рентгеном являются меньшая доступность технологии в разных медицинских учреждениях, городах и регионах, а также недоступность исследования для части пациентов, находящихся на респираторной поддержке.

Хотя рентгеновские снимки более доступны и относительно дешевле, чем компьютерная томография, последняя предпочтительнее в случае COVID-19. Это связано с тем, что рентгеновские снимки в данном случае недостаточно информативны.

При COVID-19 легочные поражения характеризуются снижением воздушности легочной ткани, или «матовым стеклом». Эти изменения не относятся строго к COVID-19; при других вирусных инфекциях они также наблюдаются, хотя и реже. По количеству пораженной легочной ткани КТ определяет тяжесть пневмонии при COVID-19:

КТ-1 – до 25 %,

КТ-2 — до 50 %,

КТ-3 — до 75 %,

KT-4-более 75%.

КТ грудной клетки рекомендуется пациентам с умеренными, тяжелыми и крайне тяжелыми ОРВИ для решения вопроса о госпитализации, оценки характера и степени изменений в легких и течения процесса, а также для определения прогноза заболевания.

КТ-исследование может выявить поражения легких у значительного числа бессимптомных и доброкачественных пациентов. В этих случаях КТ не влияет на лечение или прогноз, если COVID-19 подтвержден лабораторно. Поэтому широкое использование КТ для скрининга бессимптомных и доброкачественных заболеваний не рекомендуется.

Мы не советуем использовать радиологическое исследование у бессимптомных SARS-CoV-2 РНК-положительных пациентов. Тест на РНК SARS-CoV-2 по-прежнему необходим в дополнение к результатам рентгенологического исследования. Кроме того, отсутствие изменений на КТ не исключает наличия COVID-19 и возможности развития пневмонии через некоторое время после обследования.

Источники:

1. Временное руководство. Профилактика, диагностика и лечение новых коронавирусных инфекций (COVID-19). Версия 8.1 (01.10.2020) Министерство здравоохранения Российской Федерации. Утверждено заместителем министра здравоохранения Российской Федерации Е. Г. Камкиным. 227 с.
2. Сайт здоровья доктора Питера СПб. Специалист лаборатории объяснил, почему ПЦР-тесты на коронавирус могут давать ошибку 02/12/2020.