МЕТОДЫ ПОДСЧЕТА МИКРООРГАНИЗМОВ В СОДЕРЖИМОМ РУБЦА

Сетка – reticulum – вместимость у коров около 4-6 л, овец и коз – 1-2 л. Лежит впереди рубца в нижней части брюшной полости. Передняя часть сетки доходит до 6-7 ребра и прилегает к диафрагме. Задняя часть расположена непосредственно над мечевидным хрящом (на 5-7 см выше), где и доступна для глубокой наружной пальпации.

Поскольку сетка расположена в куполе диафрагмы, то ее непосредс­твенное исследование общими методами сопряжено с рядом трудностей. Вместе с тем патология сетки регистрируется часто, особенно ее травма­тические повреждения. По данным ряда авторов (Волотко Иван Ильич, за­щитил докторскую диссертацию в 1996 г.), металлические инородные пред­меты обнаруживают в среднем у 95% коров (исследовано 115 тысяч голов). В результате, поражаемость коров травматическим ретикулитом составляет 20%, ретикулоперитонитом – 10%, ретикулоперикардитом – 2%.

Определяют наличие у пациента травматического ретикулита с помощью общих, специальных, лабораторных и других методов. К ним относятся диагностические методы или тесты, цель которых — вызвать болевую реакцию у животных с травматическим ретикулитом. Многие из этих тестов существуют в результате того, что не существует абсолютно надежного метода диагностики. Как следствие, в производственных условиях одновременно используется несколько методов.

Цель всех тестов на болевую чувствительность сетки у крупного рогатого скота — вызвать у животного болевую реакцию. Положительные результаты заставляют животных избегать осмотра, тревожиться, стонать и т.д.

— Группа тестов, основанных на увеличении внутрибрюшного давления:

1. Надавливание на ксифоидный хрящ снизу вверх и вперед кулаком. Чтобы усилить давление на сетчатую оболочку, необходимо приподнять правую грудную конечность животного.

2. Давление на область плюсневого хряща палкой диаметром 5-7 см силой 2 человек (предложено Гетце для быков).

3. кожа на заднем крае промежности собирается в складку.

4. В тесте Рюгга (1932) животное держат с поднятой головой параллельно земле и сложенной в складку увядшей кожей.

5. Пальпация сетчатой оболочки.

6. Проведение животного сверху вниз по наклонной поверхности.

7. Путем нагнетания воздуха в рубец (тест Лейманиса).

8. Компрессия реберной части брюшной стенки слева и справа в области 10-го межреберного промежутка по линии плечевого сустава (тест Нордстрема).

В этой ситуации необходимо также обратить внимание на то, как животное встает и ложится. Во время здорового поведения при опускании корова опускается сначала на передние, а затем на задние конечности. Животное поднимается сначала на таз, а затем на грудные конечности. Необычно, когда крупный рогатый скот, лишившийся болевого синдрома в ретикулостоме (ретикулостомия), ложится и встает наоборот.

Когда доится только передняя четверть вымени, больные животные становятся очень беспокойными. Повышение внутрибрюшного давления происходит в результате изменения напряжения брюшной стенки. Тем не менее, трещины сосков и мастит должны быть исключены.

Тестирование, основанное на индукции проекционной боли:

1. Перкуссия области сетчатой оболочки и проекции книзу слева и справа. С. И. Смирнов говорит, что перкуссия начинается со слабых ударов, а затем усиливается.

2. Перкутируется область живота между белой линией и грудной веной. Начинайте постукивание от грудной кости и каудально к вымени. В этой области обычно отмечается тупой и глухой звук. Тимпанический звук возникает, когда инородное тело перфорирует сетку и газы попадают в брюшную полость (В. И. Габриолавичус, И. И. Чепулис, 1963).

3. С помощью ударного молотка постучите по линии крепления мембраны.

4. Постукивание кулаком по линии прикрепления диафрагмы (А. В. Тверецкий).

— Группа тестов, основанная на вызывании местной боли:

1. Диатермическая проба по Я.И.Клейнбоку и Г.Я.Либрейху (1947) – здоровые выдерживают силу тока 1,2-3 А, а больные беспокоятся уже при 0,2-1,5 А.

2. Использование аппарата УВЧ “Луч” (проба предложена сотр. каф. терапии академии).

3. помещение сильного магнита в область сетки, что вызывает смещение инородного тела и, как следствие, боль.

Следующая примерная группа основана на применении металлических индикаторов:

Аппарат Веллеста 1950 года выпуска.

2. Металлоиндикатор ветеринарного дизайна С. Г. Меликсетян и

М.Г. Мкртчян (1968 г.).

3. Ф. М. Черепанов (1958) разработал прибор для обнаружения инородных тел в тканях животных.

4. Металлоискатель МД-05 конструкции А. В. Коробова и А. И. Пронина.

5. Метод основан на способности ферромагнитных тел, движущихся в магнитном поле, вызывать его возбуждение, которое регистрируется индукционным датчиком.

Образцы, собранные с использованием магнитных зондов:

1. магнитный зонд, разработанный С.Г. Меликсетяном.

2. Конструкция магнитного зонда И. А. Телятникова.

3. Усовершенствованная конструкция магнитного зонда (ZMU-1)

А.В. ЗМУ-2 был разработан Коробовым, Белановским и Гербергом.

4. Универсальный электромагнитный импульсный зонд (УЭМИЗ-1), разработанный И. И. Волотько и В. В. Елистратовым.

Следует отметить, что и магнитные зонды, и металлоидникаторы эффективны только при наличии в ретикулоците ферромагнитных объектов, т.е. содержащих железо. Если ретикулоциты или инородные тела неферромагнитные, использование этих зондов ничего не дает.

— Группа тестов, основанных на усилении моторной функции преджелудка

1. 20-25 минут УФ-облучения на расстоянии 70 см (М. Т. Скородумов).

2. Затем дайте животному 15-20 мл настойки чемерицы.

3. Прием 15-25 мл соляной кислоты через рот (С. И. Смирнов, 1969).

4. Инъекцию карбохолина в разведении 1:1000 в дозе 0,001-0,003 следует вводить подкожно. За животными после инъекции наблюдают в течение 8 часов для определения температуры тела. Согласно учебнику Мовсум-Заде, положительный тест наступает, если температура повышается до 40-41oC через 2-3 часа и сохраняется в течение 2-3 часов.

5. Дать животному ледяную воду после кормления сухими концентратами. Животное либо отказывается пить, либо отворачивает голову от ведра после нескольких глотков, задерживая при этом дыхание.

— Лабораторные испытания:.

1. Проба Сулковича – уменьшение выделения кальция с мочой у жи­вотных, больных ретикулоперитонитом.

2. Пункция живота по В. И. Габриолавичусу (вдоль 9-го ребра, на 1-2 см выше грудной вены) и исследование выпотной жидкости. В 80% случаев травматического ретикулоперитонита получают серозно-фибринозный экссудат, который дает положительную реакцию Ривольта и содержит большое количество лейкоцитов.

3. Гематологические исследования показывают лейкоцитоз, нейтрофилию со сдвинутым влево ядром, повышенную скорость оседания и моноцитоз.

4. Биохимические исследования: снижение концентрации общего белка (гипопротеинемия), альбумина (гипоальбуминемия) и гамма-глобулина (гипогаммаглобулинемия), с одновременным повышением альфа- и бета-глобулина, в крови появляется С-реактивный белок, отсутствующий у здоровых животных.

Испытания графические и эндоскопические:

1. Руменография по З.С.Горяиновой: на руменограмме при травмати­ческом ретикулите появляются т.н. “малых волн”, которые отражают ос­лабленные сокращения рубца и сетки, возникающие вследствии болевых ощущуений.

2. Тонометрическая ретикулография (С.Х.Икаев, 1985): у здоровых период сокращения сетки составляет 6-6,5 с, пауза между сокращениями 40-50 с, сила – 14-15 мм. У больных период сокращений уменьшается до 4-5 с, а сила – до 3-3,5 мм.

S. Д. Гармаев, 1986), также известная как электроретикулография. регистрация биотоков, возникающих в решетке.

4. Обнаружение металлических предметов, в частности, возможно с помощью рентгенографии (И. И. Мартыновский).

5. Ретикулоскопия позволяет осмотреть полость сетчатой оболочки и наблюдать за тем, как продвигается орган.

6. С помощью лапароскопии можно осмотреть брюшину, диафрагму и рубцовую наружную оболочку, что важно для диагностики ретикулоперитонита.

Симптомы травматического поражения сетки. Животное ускользнуло от осмотра, болевая реакция ощущалась в области 10-го межреберного промежутка слева, при перкуссии по линии прикрепления диафрагмы и др. положительные тесты на болезненность сетки, скрежет зубов, стон, выгибание спины, перестановка конечностей, удар ими по животу, нарушение аппетита и жевания, гипотония преджелудков, болезненная дефекация, полипноэ, тахикардия.

При частых травматических повреждениях сетки у коров животным вводят магнитные кольца.

Исследования книг

Книжка – omasum – объемом от 7 до 18 л у коров и до 1 л у овец и коз. Лежит в правом подреберье между сеткой и сычугом, несколько дор­сальнее от них. Наиболее близко прилегает к правой реберной стенке в области 7-10 ребер по линии плечевого сустава. Исследуют книжку пос­редством пальпации, перкуссии и аускультации. Иногда, по показаниям, проводят пункцию – омазоцентез.

Надавите пальцами или рукой на межреберья в области 7-10 ребер, по линии плечевого сустава. Необходимо наблюдать за поведением животного и появлением беспокойства из-за боли, воспаления и некроза слизистых оболочек.

Техника перкуссии включает в себя ударные движения, выполняемые сильными, рывкообразными движениями (percussio stakkato) по тем же межреберным промежуткам головы. Здоровое животное не проявляет беспокойства при перкуссии и издает тупые или тупые звуки в зависимости от степени заполнения органа пищевой массой.

Аускультация книзу проводится с правой стороны по линии плечевого сустава между межреберьями 7-10. Через этот лист проводится прямая аускультация левым или правым ухом. Капсула фонендоскопа или стетоскопа прикладывается сначала к 9-му межреберью, затем к 8-му и 7-му межреберьям по линии лопаточно-плечевого сустава. Одна рука лежит на спине животного. У здоровых животных можно услышать мягкие крепитационные шумы, которые не совпадают с движениями рубца, слабее и чаще, чем шумы сокращения рубца. Ослабление шумов рубца наблюдается в случае его закупорки, воспаления и некроза.

Пункцию книжки – омазоцентез, делают в 8-м или 9-м межреберье справа по линии плечевого сустава или на 2-3 см ниже ее. Предваритель­но готовят операционное поле: область выстригают, выбривают и дезинфи­цируют. Стерильную иглу, длиной не менее 12-15 см, с мандреном, вводят по переднему края ребра справа-налево и вниз на глубину 5-8-10 см. Извлекают мандрен, присоединяют к игле шприц и вводят не менее 100 мл стерильного физиологического раствора. Затем, отсосав некоторое коли­чество жидкости, определяют правильность введения иглы. Если омазоцен­тез провели правильно, то раствор окрасится в буро-зеленый цвет, в нем будут примеси кормовых масс. Целью омазоцентеза является оказание ле­чебной помощи животному при засорении книжки, т.е. вводят лекарствен­ные вещества, пытаются предупредить высыхание содержимого, усилить сокращения листков органа.

Определенное диагностическое значение имеет омазотонометрия – из­мерение силы давления при введении изотонического раствора хлорида натрия в полость книжки через пункционную иглу (В.И.Габриолавичус). Эта сила зависит от консистенции содержимого и у здорового крупного рогатого скота составляет от 1,7 до 3,0 кг, а при закупорке книжки достигает 8,0-12,0 кг.

Конференция № 3

Тема: ДИСПАНСЕРИЗАЦИЯ

План лекции:

1. Диспансеризация как система ветеринарных мероприятий.

2. Диагностические методы в клиническом обследовании.

Этапы медосмотра включают лечебный, профилактический и организационно-хозяйственный.

Основная задача диагностического этапа – ранняя диагностика скрыто протекающих внутренних незаразных, инфекционных, инвазионных, гине­кологических и хирургических болезней. В основу этого этапа положены принципы выборочной совокупности и непрерывности. Принцип выборочной совокупности достигается благодаря исследованию животных контрольных групп. Аналогичность условий содержания и кормления обеспечивает высо­кую достоверность результатов и дают возможность на основе выборочного исследования нескольких животных сделать заключение о состоянии здо­ровья всего поголовья.

Для этого создаются контрольные группы животных. Таких групп четыре, и их размер зависит от возраста и физиологического состояния животных: 1) коровы в первые три месяца лактации; 2) коровы 6-7 месяцев лактации; 3) беременные сухостойные коровы; 4) телки за 2-3 месяца до отела.

Принцип преемственности поддерживается систематическими медицинскими осмотрами в различных точках цикла технологического развития. При обсуждении экономико-организационного этапа мы рассмотрим виды и сроки проведения диспансеризации.

Диагностический этап включает следующие виды исследований: 1) клинический осмотр и выявление синдрома стада; 2) лабораторные исследования крови, мочи, молока и кормов; 3) анализ диетического питания и кормления животных; 4) оценка условий ухода, содержания и использования животных.

Клиническое обследование. Диспансеризация предполагает проведение клинического осмотра животных, всего стада (при наличии достаточного количества специалистов) или только животных контрольных групп ветеринарными специалистами хозяйства. Клиническое обследование животного проводится в соответствии с общепринятым планом клинического обследования животных.

Синдроматики стада – это комплекс хозяйственно-экономических по­казателей, дающий общую характеристику стада по состоянию здоровья. Это групповой, сопоставительный синдром, изучаемый в динамике за дли­тельный период времени.

Синдроматика стада включает: продуктивность коров, их вес, средние сроки использования, интенсивность выбраковки и анализ ее причин, динамику воспроизводства, выход телят на 100 коров, вес телят и их состояние при рождении, заболеваемость и смертность молодняка, заболеваемость маститом и другими гинекологическими болезнями, а также динамику клинических и биохимических показателей, оценку экономической эффективности проводимых ветеринарных мероприятий. Необходимо также уточнение эпидемической ситуации по инфекционным и инвазионным болезням.

Следовательно, показатели синдроматики свидетельствуют о прошлом, но ее информация может выявить недостатки производства, помочь проанализировать общее состояние скота и наметить пути развития в будущем.

Кровь, моча, молоко и корм могут быть исследованы в лаборатории. В рамках своих обязанностей диспансер исследует биологические жидкости, ткани и кал. Чаще всего анализ проводится в ветеринарных производственных лабораториях на крупных специализированных фермах или в районных ветеринарных больницах. У 20-30% животных контрольной группы или 5% от общего поголовья собирают кровь. Молекулярные показатели крови включают скорость оседания, концентрацию гемоглобина, количество эритроцитов и лейкоцитов, а также лейкограмму. Биохимические показатели позволяют оценить уровень общего белка, резервной щелочности, общего кальция, неорганического фосфора, каротина и других показателей, исходя из методов, используемых в каждой лаборатории.

Мы собираем образцы мочи для лабораторного анализа у 20-30% животных в контрольных группах или у 15-20% от общего числа животных. Моча исследуется на предмет ее физических и химических свойств. Для этого анализа необходима свежеполученная моча, поэтому его лучше всего проводить в производственных условиях.

Мы также исследуем молоко и кал, а также образцы корма и кровь. Фекалии берутся у 10%-20% коров. В лаборатории эти показатели определяются соответствующим отделом.

Анализ питательности кормов и рационов животных.

Недостаток, а в некоторых случаях и избыток питательных и биологически активных веществ в рационах животных являются причинами специфических заболеваний при дефиците кормов (кетоз, гиповитаминоз, микроэлементозы, остеодистрофия, диспепсия, анемия и др. Животные, восприимчивые к инфекционным и инвазионным болезням, часто бесплодны, имеют эмбриональную смертность, рождают слабые пометы.

Кормление скота становится все более важным в условиях промышленных технологий. Кроме того, изменились традиционные условия жизни животных, их численность сконцентрирована на небольших территориях. Организм в такой ситуации, естественно, более чувствителен к неблагоприятным факторам кормления.

При анализе кормления определяют его уровень и тип, а также структуру рациона. Для облегчения расчетов разработаны детализирован­ные нормы кормления крупного рогатого скота по 24 показателям. Вот эти показатели Вы и должны будете рассчитать для исследуемого животного так, как научились при изучении дисциплины “Кормление сельскохозяйс­твенных животных”.

Оценить уход за животными, их содержание и использование.

Вам необходимо выяснить. Тип коровника (пример: типовой 4-х рядный коровник). Тип вентиляции. (пример: вентиляция приточно-вытяж­ная, приток через двери, окна и т.д., вытяжка – через шахты). Как проводится уборка навоза. Чаще на фермах скребковым транспортером в тракторную тележку. Какие полы в стойлах, какой используется подстилочный материал и его количество на 1-ну голову. Как осуществляется кормление, водопой и доение животных. Проводят ли моцион животных, как, где и сколько времени он занимает.

Терапевтический этап является логическим продолжением диагностического этапа. Больных животных лечат. В основе лечения лежат общие принципы терапии: индивидуальность (лечить пациента, а не болезнь), физиологический характер терапии, ее наступательный и эффективный характер, экономичность, комплексность.

Клинически здоровых животных, но с низким уровнем обмена веществ, субклиническом течении болезней, связанных с нарушением обмена веществ подвергают заместительной и нормализующей терапии. Заместительная те­рапия применяется при белковой, углеводной, витаминной, минеральной и липидной недостаточности. Нормализующая – при глубоких нарушениях об­мена веществ. Форма лечения – групповая, т.к. низкий уровень обмена веществ или его нарушения распространяются на большую часть или даже на все стадо.

При возможности применяют корма с лечебной целью, т.е. проводят диетотерапию. Основное ее назначение – путем специального кормления устранить патологический процесс и восполнить недостающие в организме вещества. Диетотерапию проводят с учетом вида, породы, возраста, про­дуктивности животных, технологии производства и конкретной патологии. В качестве диетических кормов крупному рогатому скоту используют све­жескошенную траву, разнотравье, клеверное или люцерновое сено, травя­ную муку, морковь, кормовую свеклу, комбинированные корма с добавками витаминных и минеральных компонентов.

Учитывая состояние животных и поставленный диагноз, ветеринар назначает или изменяет рацион, корректирует режим и объем кормления. Когда скот находится в состоянии кетоза, он потребляет больше легкоусвояемых углеводов (сено, травяная мука, фураж или сахарная свекла, патока, трава) и потребляет меньше концентратов.

На профилактическом этапе диспансеры применяют общие и специфические меры. В первую очередь, это организация полноценного кормления животных. Это контроль за качеством приготовления, хранения и использования кормов. Контроль за качеством воды и режимом водопоя животных. Создание оптимальных условий содержания, ухода, кормления и использования животных, в соответствии с их продуктивностью и обменом веществ. Проведение тренингов и обучения персонала, участвующего в содержании животных на регулярной основе.

Полноценное и правильное кормление, создание оптимальных условий жизни, а также использование различных биостимуляторов способствует повышению естественной резистентности и иммунобиологических свойств организма животных. В результате повышается количество и качество животноводческой продукции.

Организационно-экономический этап. Ветеринарная экспертиза проводится под руководством главного ветеринарного врача района, который также является государственным ветеринарным инспектором на вверенной ему территории. Клинические осмотры проводят специалисты как государственной (работники станций по борьбе с болезнями животных и ветеринарных лабораторий), так и ведомственной ветеринарных служб. Обязательно участие зоотехников, руководителей хозяйств, бригадиров и начальников участков промышленных комплексов.

Различают основную и промежуточную диспансеризацию. Основную дис­пансеризацию животных в обычных (традиционных) хозяйствах проводят не менее двух раз в год (весной – перед переводом животных на пастбищное содержание и осенью – после постановки на стойловое содержание). В промышленных комплексах диспансерное обследование проводят один раз в квартал.

Повторное медицинское обследование (применяются ограничения) проводится после основного (выборочно, для определенных групп животных). В этом случае клиническому осмотру подвергается не менее 10% наиболее типичных животных всего стада. Кровь, моча, молоко и т.д. исследуются в лаборатории. проводится в уже упомянутом объеме.

Тест можно классифицировать следующим образом в зависимости от его цели:

– диспансеризация при внутренних незаразных болезнях;

– акушерско-гинекологическая диспансеризация животных;

– хирургическая диспансеризация;

– эпизоотологическая диспансеризация;

– диспансеризация при инвазионных болезнях.

Все эти виды медицинских осмотров будут подробно рассмотрены при изучении соответствующих дисциплин.

Различные виды медицинских осмотров различаются в зависимости от возраста, вида и пола осматриваемых животных. Например, осмотр лошадей, коров, быков, молодняка крупного рогатого скота, свиней, овец и т.д.

На организационно-хозяйственном уровне диспансера заполняются диспансерные карты, на которых указываются регистрационные данные животного, дата осмотра, результаты клинического и лабораторного обследования. Имеется заключение о состоянии здоровья животного.

Комиссией составляется диспансерный отчет, в котором указываются состав комиссии и задачи диспансера, результаты обследования животных, рекомендуемые лечебно-профилактические, организационные и хозяйственные мероприятия.

Результаты клинического обследования должны быть подведены на советах, правлениях, совещаниях и т.д. Кроме того, намечаются конкретные меры по устранению негативных моментов, выявленных в ходе клинического обследования, и назначаются исполнители.

Мы разрабатываем план ветеринарных и зоологических работ вместе с конкретными действиями, такими как выбраковка малоценных и непригодных для лечения животных.

Конференция №4

Тема: Изучение заболеваний системы кровообращения

Бумажная раскладка :

1. Система для получения, стабилизации и анализа крови у животных.

Анализ крови и его диагностическое значение в общеклинической практике.

Расчет скорости оседания и концентрации гемоглобина с помощью различных методов. Клиническая интерпретация результатов.

4. Подсчет эритроцитов и клиническая оценка результатов

Литература:

Необходимость исследования крови определяется прежде всего ее физиологической ролью, а также изменениями, происходящими в ней при различных патологических состояниях. Дело в том, что кровь тесно связана со всеми органами и тканями. Эндокринная система, наряду с нервной, определяет единство и целостность организма, обеспечивая его гомеостаз.

Основная функция крови — перенос кислорода, аминокислот, сахаров, жиров, витаминов и т.д. к органам, тканям и клеткам. необходимых для их функционирования; удаление углекислого газа и продуктов обмена веществ через органы выделения; регуляция кислотно-основного баланса, осмотического давления, температуры тела и т.д. Нейрогуморальная регуляция и иммунная функция (фагоцитоз, выработка антител).

Сочетание исследования крови с клиническим осмотром животного позволяет: 1) обнаружить скрытые изменения в органах и тканях, например, диагностировать субклиническую форму болезни (серологически: бруцеллез, лептоспироз, пуллороз птицы, вирусные респираторные и другие болезни; биохимически: нарушения обмена веществ); 2) определить возникшие осложнения; 3) дифференцировать сходные болезни; 4) судить о тяжести заболевания; 5) оценить функциональное состояние отдельных органов и систем; 6) контролировать эффективность лечебно-профилактических мероприятий; 7) прогнозировать исход болезни.

В республиканских, областных, районных и других производственных ветеринарных лабораториях, а также в ГГАУ, ВГАВМ и БелНИИЭВ проводятся исследования крови. Общеклинический анализ крови (ОКА) проводится районными лабораториями и включает измерение скорости оседания, концентрации гемоглобина, количества эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов, получение лейкограмм. Также в ОКА крови входят расчетные показатели: цветовой показатель (ЦП) и среднее содержание гемоглобина в эритроците (СКГЭ).

В биохимическом анализе крови измеряется содержание в сыворотке общего белка, глюкозы, кальция, неорганического фосфора, каротина и щелочного резерва. Кроме того, в лабораториях высокого класса среди прочих более сложных исследований определяют состав различных микроэлементов, витаминов, белковых фракций, липидов, активность многих ферментов.

Ветеринарные лаборатории также проводят серологические, бактериологические, иммунологические и многие другие исследования, для которых требуется стабилизированная кровь или её сыворотка.

Для забора крови используются животные и птицы. Для проведения исследования необходимо сначала взять кровь. Кровь берут в сухие, чистые пробирки, желательно с пробками, или непосредственно в шприцы, или используют специальные системы взятия крови.

Для получения плазмы, а также для подсчета эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов в кровь добавляют комбинацию антикоагулянтов. К ним относятся гепарин, трилон Б (двухвалентная соль этилендиаминтетрауксусной кислоты), цитрат натрия, оксалат натрия или калия, фторид натрия.

Для стабилизации 10 мл крови (половина стандартной лабораторной пробирки) требуется 50 единиц гепарина. Для отмеривания одной-двух капель раствора используется тонкая внутрикожная игла для туберкулинизации. Для исследования того же объема крови потребуется 3-4 капли 10% раствора Trilon B, или 30 мг цитрата натрия (или 0,3 мл 10% раствора), 15 мг оксалата калия или натрия или 0,15 мл 10% раствора, 0,3-0,5 мл 10% раствора фторида натрия.

Для одновременной стабилизации и консервации крови, смесь, состоящая из:

10 частей НАТРИЯ ФТОРИДА

1 дель тимоле

3 части КАЛИЯ ОКСАЛАТА

Смесь растирают в ступке, на 15 мл крови необходимо 50 мг этой смеси. Стабилизированную кровь хранят в холодильнике при температуре 4^оС. Для подсчета форменных элементов кровь пригодна в течение 72 ча­сов, для приготовления мазков – не более 24 часов.

Животным берут кровь как в малых, так и в больших количествах. Используются различные инструменты: Игла Франка, перо Дженнера, скарификатор, ланцет, остроконечный скальпель, ножницы, лезвие. Наряду с короткими инъекционными иглами и остроконечным скальпелем часто используются ножницы и лезвие. Для получения крови в больших количествах используются иглы для забора крови различных конструкций (трубчатая ветеринарная игла с пластиной, трубчатая ветеринарная игла N 2032 с ограничителем, трубчатая ветеринарная игла N 2070, трубчатая ветеринарная игла N 2540 для забора крови).

На практических занятиях мы продемонстрируем вам некоторые приспособления, которые помогают надежно зафиксировать трубку и иглу для кровопускания в крупных кровеносных сосудах, чтобы облегчить забор крови.

Для получения сыворотки кровь берут в сухие, чистые пробирки, стабилизатор не добавляют. В процессе свертывания кровь держат в теплом месте 20-30 минут, если через 20-30 минут сгусток не появляется, то с помощью тонкой стеклянной палочки или палочки отделяют сгусток от стенки пробирки. Сыворотку можно получить путем центрифугирования крови при двух-трех тысячах оборотов в минуту в течение 10-15 минут. Затем сыворотку переливают в отдельные чистые пробирки.

Образцы крови могут быть маленькими или большими в зависимости от цели исследования. Для получения небольшого количества крови необходимо проколоть края ушей крупного рогатого скота, овец, коз, лошадей и собак. Для оценки показателей заранее подготавливают посуду и реактивы. Затем на основание уха накладывают жгут или сдавливают пальцами свободной руки. Методом укола палец разрезают, а кожу протирают эфирным спиртом, чтобы продезинфицировать ее, а также вызвать гиперемию и подсушить место забора крови. Чтобы подготовить палец к пункции, под место прокола подкладывают ватный тампон. Поместив иглу или ручку поперек сосуда, иглой или ручкой проколите его. Капля крови появится в виде сферы, если прокол сделан правильно. Сначала удалите две капли стерильными ватно-марлевыми салфетками. После этого производится забор крови для гематологического анализа. При выявлении возбудителей паразитарных заболеваний крови (пироплазмидоза) используется только первая капля.

Если кровоток недостаточен, сосуды не следует сдавливать или массировать, так как это может вызвать смешивание лимфы, что может исказить результаты. Чтобы остановить кровотечение, после взятия крови место инъекции следует смазать и осторожно сдавить на две-три минуты ватным тампоном, смоченным в 5% растворе йодированного спирта.

У лошадей кровь берут из краевых сосудов уха, которые проходят по внутренней поверхности ушного хряща. При этом особое внимание необ­ходимо обращать на надежную фиксацию животного, лучше в станке, при его отсутствии – за уздечку или с наложением закрутки на верхнюю губу.

В ушах и гребне цыплят собирается небольшое количество крови. Смочите ватный тампон эфирным спиртом, затем очистите место взятия пробы и сделайте ланцет. Скарификаторы или инъекционные иглы прокалывают кожу для сбора капилляров, как у животных. После взятия пробы для протирания места прокола используют губку, смоченную этиловым спиртом 70o.

Кровь, смешанная с каким-либо антикоагулянтом, постепенно разде­ляется на два слоя: нижний – состоящий из форменных элементов крови, главным образом эритроцитов, и верхний – образованный плазмой. Ско­рость такого разделения не одинаковая у животных разных видов и значи­тельно изменяется при некоторых заболеваниях. Это и предопределило, что данный тест нашел довольно широкое применение в лабораторной диаг­ностике болезней животных.

Вначале эритроциты оседают только под действием силы тяжести. Кроме того, существует множество факторов, влияющих на скорость оседания: вид животного (видовые особенности соотношения альбумин/глобулин); физиологическое состояние (беременность); патологическое состояние (воспаление, анемия); температура окружающей среды.

Так, при увеличении количества глобулинов и фибриногена, холесте­рина, кальция и бария, уменьшения числа эритроцитов СОЭ возрастает. Замедляется же скорость при увеличении количества альбуминов, концент­рации желчных пигментов, натрия и калия, при увеличении числа эритро­цитов. На СОЭ влияет и температура (при снижении СОЭ замедляется), ко­личество антикоагулянта (чем больше – тем быстрее), некоторые препара­ты (особенно содержащие белок – сыворотки, вакцины).

Как можно скорее после забора крови рассчитывают скорость оседания (не позднее чем через 2 часа). Ветеринарная практика в основном остановилась на двух методах: макрометод (Неводова) и микрометод (Панченков).

А.П.Неводов в свое сремя предложил метод определения СОЭ только для лошадей. Сущность метода: в эритроседиометр (градуир. пробирка вы­сотой 15 см, объем 10 мл) вносят 0,02 г натрия оксалата и до верхней метки набирают из яремной вены кровь. Учет ведут через 15; 30; 45; 60 мин. Средняя в норме составляет 38-48 (43). Если высота эритроцитов в эритроседиометре менее 38 – говорят о замедлении, а более 48 – об ус­корении СОЭ.

Методика Панченкова предполагает использование одноименного аппарата, состоящего из штатива и градуированных капилляров. Раствор цитрата натрия (5%) вдувают в капилляр до метки Р, затем кровь увеличивают вдвое до метки К (0,2 мл) и также вдувают на стекло. Все тщательно перемешивается и набирается в тот же капилляр. Отсчет производится через 1 час или 24 часа, результат измеряется в миллиметрах. Если пипетку поставить не вертикально, а под углом 50 градусов, то эритроциты оседают гораздо быстрее. Это происходит из-за изменения поверхностного натяжения крови в пипетке.

У здоровых животных СОЭ по Панченкову, при вертикальном располо­жении капилляра, составляет в мм за 1 ч: крупный рогатый скот – 0,5-1,5; овца – 0,5-1; коза – 0,3-1; лошадь – 40-70; свинья – 2-9; со­бака – 2-6.

СОЭ не является специфической для какого-либо заболевания, однако ускорение всегда указывает на наличие патологического процесса и наб­людается при различных формах анемии (особенно ИНАН), инфекционных и инвазионных заболеваниях, воспалительных процессах, злокачественных новообразованиях и др. Замедление СОЭ – утомление, гипергидроз, диа­рейном синдроме, механической и паренхиматозной желтухах гипохромная анемия и др.

Для определения концентрации гемоглобина было предложено несколько методов. Одними из самых распространенных являются колориметрические, которые опираются на производные гемоглобина. Помимо них иногда используются газометрические методы (Hb насыщается кислородом или углекислым газом, и по их количеству определяется концентрация Hb). Существует также метод, основанный на определении железа в гемоглобине, который содержит 0,347% этого элемента.

Наиболее простым и распространенным в лабораторной практике является колориметрия солянокислого гематина, на котором основан метод Сали. Для гемометра необходим штатив с тремя трубками. Внешние трубки содержат стандартное измерение и запаяны. Средняя трубка градуирована. До нижней метки наливают 0,1 н раствор соляной кислоты, затем добавляют 0,02 мл стабилизированной крови. Дайте эритроцитам 5 минут для полного разрушения. (для анализа крови млекопитающих) или 10 мин. (в случае с кровью птиц). В результате реакции между гемоглобином и HCl образуется солянокислый гематин, который имеет коричневый цвет. Затем, капля за каплей, в пробирку с образцом добавляется дистиллированная вода, пока ее цвет не совпадет со стандартом. Результат считывается со шкалы на пробирке.

Хотя этот метод прост и быстр, он недостаточно точен. Если сложить различные ошибки, возникающие при использовании этого метода, то получается, что погрешность составляет 30%. В результате, в настоящее время метод не может быть рекомендован для лабораторного использования.

Метод цианирования гемоглобина с использованием ацетонангидрина принят как унифицированный метод в медицине. При использовании метода железнокислый калий (красная кровяная соль) окисляет гемоглобин до метгемоглобина (гемиглобина). Колориметрический анализ используется для определения цветной формы цианметгемоглобина (цианида гемоглобина), образовавшегося с ацетонангидрином. В инструкции, прилагаемой к набору для определения гемоглобина описанным выше методом, объясняется процедура.

У здоровых животных концентрация гемоглобина составляет (г/л): крупный рогатый скот – 90-120; овца – 90-133; коза – 100-150; лошадь – 80-140; свинья – 90-110; собака – 110-170.

Повышение концентрации гемоглобина называется гиперхромемией. С ней связан ряд заболеваний, таких как диарея, рвота, гипергидроз, образование экссудата и транссудата, миоглобинурия и эмфизема легких. Гипохромия (олигохромия), или снижение уровня гемоглобина, чаще встречается при анемии. Человек с таким симптомом, скорее всего, страдает от так называемых дефицитных форм анемии (дефицит железа, витамина В12, ферментов и т. д.) ).

Определение концентрации гемоглобина имеет также прогностическое значение. Прекращение снижения или постепенное повышение концентрации гемоглобина является благоприятным симптомом, уменьшение же его коли­чества до 50 г/л – это неблагоприятный признак. Выявление показателя в 30 г/л является угрожающим для жизни животного симптомом.

Эритроциты, а также лейкоциты и тромбоциты считаются кровообразующими элементами. Их количество подсчитывается в ходе общего клинического анализа крови, а также оценки CRP, концентрации гемоглобина, лейкограммы и показателей красной крови, включая цветовой показатель (CIN) и гемоглобин на эритроцит (HPC).

Эритроциты – самые многочисленные форменные элементы крови, кото­рые содержат гемоглобин. Следовательно, их основная функция в организ­ме – осуществление газообмена. С помощью гемоглобина эритроциты пере­носят кислород и углекислоту. Кроме того, эритроциты доставляют клет­кам аминокислоты и липиды, принимают участие в регуляции кислотно-ще­лочного равновесия, выполняют защитную и другие жизненно важные функ­ции, которые более подробно рассматривали в курсе физиологии.

Содержание эритроцитов в крови здоровых животных и птицы довольно постоянное, поэтому установление изменения их количества имеет диаг­ностическое значение. Правда, колебания их числа можно наблюдать в за­висимости от времени суток исследования, возраста, пола, продуктивнос­ти, физической нагрузки животного. Так, например, количество эритроци­тов днем несколько меньше чем вечером, у новорожденных их содержание выше чем у взрослых, также как и у самцов по сравнению с самками. У высокопродуктивных коров показатели содержания эритроцитов выше чем у малопродуктивных. Установлено также, что у лошадей после физической нагрузки (например 10-минутная прогонка рысью – проба по Домрачеву) число эритроцитов увеличивается на 20 и более процентов.

Количество эритроцитов должно оцениваться клинически с учетом этих факторов. В медицинской практике существует два метода подсчета эритроцитов:

1. Подсчет в счетной камере с использованием микроскопа;

2. Подсчет посредством электронных автоматических счетчиков. Ранее практиковались методы определения числа эритроцитов с помощью эритроседиометра (градуированной пробирки для определения СОЭ по Нево­дову), эритрогемометра и фотоэлектроколориметра, однако, из-за низкой их точности, в настоящее время они не используются. Погрешность же метода подсчета форменных элементов в камере составляет 2-5%, а в ав­томатических анализаторах и того меньше – до 2%. Это и предопределя­ет широкое применение названных методов не только в лабораторной прак­тике, но и в научных исследованиях.

Подсчет эритроцитов в камере. Метод предполагает равномерное смешивание определенного объема крови с определенным объемом жидкости. Разбавленная кровь помещается в камеру с известным объемом. На дне камеры находится сетка, которая облегчает точный подсчет эритроцитов с помощью микроскопии.

Предложено несколько счетных камер, из которых наибольшее расп­ространение в странах бывшего СССР получила счетная камера с стекой Горяева. Ее нередко так и называют “камера Горяева”, хотя фактически это камера Бюркера с сеткой Горяева (1910).

Счетная камера – это толстое предметное стекло с четырьмя попе­речными желобками, между которыми расположены три плоскости. Средняя плоскость на 0,1 мм тоньше боковых и разделена продольным желобом на две равные половины, на каждой из которых выгравирована сетка Гряева. Если на боковые плоскости камеры наложить покровное стекло и притереть его до появления радужных колец, т.н. “колец Ньютона”, то над средней плоскостью будет щелевидное пространство высотой 1/10 мм.

Сетка Горяева имеет размер 3х3 мм, т.е. ее площадь равна 9 мм². На ней нанесено 225 больших квадратов, 25 из которых разделены на 16 маленьких, 100 квадратов не разграфлено и еще 100 разделены на прямоу­гольники. Площадь одного маленького квадратика составляет 1/400 мм², а объем камеры над ним – 1/4000 мм³.

Что касается техники подсчета эритроцитов, то здесь соблюдается следующая последовательность действий: 1) разведение крови; 2) заполнение счетной камеры; 3) собственно подсчет клеток; 4) подсчет абсолютного количества эритроцитов.

1 этап. Поскольку эритроцитов в крови содержится значительное ко­личество, например у коровы массой 400 кг – более 125 млрд. клеток, то определить их количество возможно только после разведения крови. Для разведения чаще применяют 0,85-3%-й раствор натрия хлорида или 5%-й раствор натрия цитрата. Применение растворов большей или меньшей кон­центрации недопустимо, поскольку приведет к разрушению эритроцитов.

Кровь разводят или в меланжере-смесителе для эритроцитов, или в пробирке (по Н.М.Николаеву, 1954). Меланжер представляет собой капил­лярную трубочку длиной 10 см с шаровидным расширением. Внутри расшире­ния находится шарик, который способствует равномерному перемешиванию крови и жидкости. Поскольку предложены меланжеры как для эритроцитов, так и для лейкоцитов, то цвет этого шарика может быть различным: крас­ный шарик – это меланжер для эритроцитов, белый – для лейкоцитов.

Для исследования используется как стабилизированная кровь, так и нестабилизированная сразу же после взятия. Кровь набирают в меланжер до метки “0,5” или “1”. Конец смесителя очищается ваткой от крови и сразу же набирается до метки “101” разбавляющая жидкость. Отверстия смесителя закрывают большим и средним пальцами и перемешивают в тече­ние 2-3 мин., после чего удаляют на вату первые три капли, а четвертую вносят в счетную камеру. Если кровь набирали до метки “0,5”, то полу­чают разведение в 200 раз, если до “1” – в 100 раз.

При использовании пробирочного метода разведения крови раствор хлорида натрия помещают в пробирку объемом 4 мл. Капилляром от гемометра Сали набирают 0,02 мл крови и продувают в пробирку, затем капилляр несколько раз промывают раствором. Кровь, разбавленная в 200 раз, тщательно перемешивается.

Шаг 2. Жидкость помещают в камеру горизонтально, позволяя ей покрыть всю поверхность решетки. Не должно быть пузырьков воздуха. После заполнения камеру следует оставить в горизонтальном положении на одну минуту, чтобы эритроциты осели.

3 этап. Подсчет эритроцитов проводят под микроскопом, лучше при среднем увеличении (объектив х40, окуляр х7) при несколько затемненном поле, чтобы лучше просматривались линии сетки. Учет клеток ведется в пяти больших квадратах, разделенных на 16 малых. Начинают подсчет с верхнего левого большого квадрата сетки. Затем переходят к следующему квадрату, расположенному по диагонали, затем аналогично к следующему и т.д. Есть и другой принцип подсчета – в 4-х квадратах по углам и в 1-м квадрате в центре сетки.

Подсчет начинается с верхнего левого угла большого квадрата. После этого перейдите ко второму, третьему и четвертому квадратам того же ряда. После подсчета клеток первого ряда перейдите ко второму ряду и считайте в обратном порядке. Подсчитайте эритроциты во всех 16 маленьких квадратах, а затем перейдите к следующему большому квадрату.

Существуют два правила подсчета эритроцитов в большом квадрате во избежание двойного счета:

Подсчитайте все эритроциты внутри и на левой и верхней линиях квадрата. Правая и нижняя линии подсчитываются вместе с другими квадратами. Сверху и снизу квадраты, лежащие на правой и нижней линиях, считаются с последним квадратом. Используя этот метод, мы считаем только клетки внутри квадратов, на линиях и прилегающие к ним изнутри. При подсчете не учитываются эритроциты, лежащие вне квадрата.

2) второй метод предполагает подсчет в том же порядке, но отличается от первого тем, что подсчитываются клетки, прилегающие к линиям не только изнутри, но и снаружи. В этом случае не учитываются эритроциты, прилегающие к правой или нижней линиям. По мнению большинства исследователей, первый метод является наиболее точным.

Шаг 4. Для того чтобы найти абсолютное количество эритроцитов, используйте формулу X = A. B/B. G, где

Х – количество эритроцитов в 1 мкл крови;

А – количество эритроцитов, подсчитанное в 5 больших квадратах;

Б – степень разведения крови (200);

В – количество маленьких квадратиков в 5 больших квадратах (80);

Г – объем счетной камеры над маленьким (1/4000 мм3).

Таким образом, формула выглядит следующим образом: X = A.10000. В качестве примера, если в 5 квадратах содержится 590 эритроцитов, то в 1 литре крови содержится 5 900 000 клеток. Необходимо умножить полученный результат количества клеток в 1 литре на 106, то есть. 5,900,000.106 = 5.9.1012/l.

Подсчет эритроцитов с помощью электронных счетчиков. Они становятся все более популярными, поскольку позволяют автоматизировать исследование, повысить его точность и исключить субъективность. Существует несколько типов используемых кондуктометрических счетчиков, наиболее известные — Coulter (Франция), Celloscope (Швеция) и Pikoskel (Венгрия). Принцип действия таких счетчиков основан на разнице в электропроводности форменных элементов крови и жидкости, в которой они находятся. При этом клетки, проходя через микроотверстие капиллярной трубки, изменяют сопротивление электрической цепи, что регистрируется электромагнитным устройством. На цифровом дисплее через 15-20 секунд отображается количество эритроцитов.

В крови здоровых животных и птицы содержится следующее количество эритроцитов: крупный рогатый скот – 5,0-7,5; овцы – 7,0-12,0; козы – 12-18; лошади – 6,0-9,0; свиньи – 6,0-7,5; собаки – 5,2-8,4; куры – 3,0-4,0 на 10¹²/л.

При анемиях различного происхождения (постгеморрагических, гемолитических, железо- и витаминодефицитных, гипо- и апластических, связанных с нарушениями кроветворения) чаще всего наблюдается уменьшение количества эритроцитов (эритроцитопения, олигоцитемия). Эритроцитопения встречается при инфекционной анемии у лошадей, гематурии у крупного рогатого скота, а также при многих острых и хронических интоксикациях.

Увеличенное содержание эритроцитов в крови – эритроцитоз (полици­темия) наблюдается чаще при заболеваниях, связанных с потерей организ­мом жидкости, в частности при диспептическом неонатальном и диарейном синдромах. Она бывает в начальную стадию инфекционных и лихорадочных заболеваний, при болевом абдоминальном синдроме, при пороках сердца в стадию декомпенсации, при отравлении фосфором, ртутью, окисью углеро­да, альвеолярной эмфиземе легких.

Класс №5

Тема: Изучение кровеносной системы

Резюме конференции:

1. Расчет количества красной крови и его значение в дифференциальной диагностике анемии.

2. Анемический и полицитемический клинико-лабораторные синдромы.

Обзор способов определения количества лейкоцитов и их клинического значения.

4. Показания к исследованию и методы подсчета тромбоцитов.

1. расчет эритроцитарных индексов и их значение

Дифференциальная диагностика анемий

При ряде заболеваний может происходить изменение насыщенности эритроцитов гемоглобином, что устанавливают посредством расчета индек­сов красной крови – цветового показателя (ЦП) и содержания гемоглобина в эритроците. ЦП дает представление об отношении концентрации гемоглобина к ко­личеству эритроцитов. Метод определения основан на сравнении получен­ных результатов с нормативными показателями здоровых животных.

ЦП рассчитывается по формуле: ЦП = Hb2.Е1/Hb1.Е2, где гемоглобин 1 и эритроциты 1 – это средние показатели у здорового животного данного вида и возраста; гемоглобин 2 и эритроциты 2 – это найденные показа­тели у исследуемого животного. Например:

У всех здоровых животных CP составляет 10,15, т.е. диапазон изменения составляет от 0,85 до 1,15.

Для определения среднего уровня насыщения эритроцитов гемоглобином рассчитывается другой показатель: SGE. Используется формула:

СГЭ = Hb (г/л):Е (1012/л).

СГЭ равно: у крупного рогатого скота – 15-20; свиней – 16-19; лошадей 17-20 пг.

Определение индексов красной крови имеет значение в дифференци­альной диагностике анемий. При подострой постгеморрагической анемиии, когда одновременно уменьшается содержание гемоглобина и количество эритроцитов, ЦП приближается к 1, а СГЭ такое же как и у здоровых жи­вотных. ЦП меньше единицы и снижение СГЭ, или гипохромия, бывает при алиментарной, а также при хронической посгеморрагической анемии. Для этих нозологических форм анемии симптом гипохромии является типичным. Гиперхромия, это когда ЦП больше единицы и увеличивается СГЭ, – харак­терный признак гемолитической анемии, поскольку значительно уменьшает­ся количество эритроцитов.

2) Клинические и лабораторные анемии и полиглобулиновые синдромы

Во внутренней патологии животных существуют следующие основные группы анемий: 1) постгеморрагические (после кровопотери); 2) гемолитические (вследствие повышенного разрушения эритроцитов); 3) гипо- и апластические (связанные с нарушениями кроветворения); 4) железо- и витаминодефицитные, или алиментарные (вследствие недостатка железа, витамина В12, фолиевой кислоты).

Клинически анемия определяется как снижение концентрации гемоглобина, чаще как снижение количества эритроцитов на единицу объема крови. При истинной анемии имеет место либо функциональная недостаточность системы эритроцитов в ответ на абсолютное снижение массы эритроцитов (гиповолемия), либо функциональная недостаточность гемоглобина в каждой клетке.

Анемия почти всегда вторична и является проявлением какого-либо заболевания. Патогенетическим механизмом анемии может быть любое заболевание, приводящее к уменьшению количества крови в организме в результате либо острой или хронической кровопотери, либо повышенного разрушения крови (гемолиза), либо нарушения образования эритроцитов в костном мозге. При многих заболеваниях и патологических состояниях анемия является ведущим признаком и определяет прогноз состояния.

Существует множество признаков и симптомов анемии, включая бледность слизистых оболочек и кожи; одышку; тахикардию, увеличение скорости оседания крови; гипохромемию (олигохромемию), эритроцитопению (олигоцитемию). При тяжелой анемии может наступить коллапс. При тяжелой гемолитической анемии наблюдается гемоглобинурия.

Анемический синдром у животных проявляется при следующих патологических состояниях и заболеваниях: наружные и внутренние, острые и хронические кровотечения; гемолитические отравления и интоксикации; гемоспоридиоз; дефицит или нарушения усвоения железа, гиповитаминоз; нарушения эритропоэза; аутоиммунные и инфекционные болезни с геморрагическим синдромом (см.), лучевая болезнь. Анемия развивается также при неполноценном кормлении животных.

Полицитемический синдром — это патологическое состояние, характеризующееся увеличением количества форменных элементов в крови. Поскольку большую часть массы форменных элементов составляют эритроциты, это состояние часто называют эритремией, хотя этот термин правомерен только по отношению к системному абсолютному и первичному эритроцитозу, обусловленному патологией эритроидного ростка медуллярного кроветворения. Гипоксия, стеноз легочной артерии и метгемоглобинемия могут быть причинами абсолютного эритроцитоза. Относительный (временный) эритроцитоз связан с потерей жидкости, стрессом, системной артериальной гипертензией, повышенной физической активностью.

Признаки полицитемического синдрома включают слизистые оболочки темно-вишневого цвета и кровотечения. Отсроченная SLE (почти отсутствует у крупного рогатого скота); гепатомегалия у крупного рогатого скота, спленомегалия у лошадей.

Полицитемический синдром развивается с диареей, гипергидрозом, экссудатами, язвами, легочной недостаточностью от бактериальной, вирусной и паразитарной пневмонии, эмфиземой альвеол и декомпенсированной сердечной недостаточностью. Синдром может развиваться при заболеваниях, сопровождающихся непроходимостью желудочно-кишечного тракта (расширенный желудок, метеоризм и кишечная энтералгия, илеус). Полицитемия характерна для инфекционного конского энцефаломиелита.

Методика и клиническое значение определения количества лейкоцитов

Лейкоциты, или белые кровяные тельца, в организме выполняют прежде всего защитную функцию. В зависимости от форм они участвуют в фаго­цитозе, выработке интерферона, лизоцима, прпердина, гистамина и других биологически активных веществ. Лимфоциты играют основную роль в специ­фических защитных реакциях – формировании клеточного и гуморального иммунитета.

Для подсчета белых кровяных телец были предложены следующие два метода:

1. Ошибка при этом методе составляет 7%.

2. Используются автоматизированные счетчики (погрешность 2%).

Для подсчета лейкоцитов используется та же камера с сеткой, что и для подсчета эритроцитов. Меланжер или пробирка используется для разбавления крови жидкостью Турка. Жидкость Турка состоит из 100 мл 3% уксусной кислоты и 1 мл 1% генцианвиолета или метиленового синего. Белые кровяные тельца окрашиваются, а красные кровяные тельца разрушаются.

При разведении в меланжере набирают кровь в смеситель для лейко­цитов до метки “0,5” или “1”, а до метки “11” – жидкость Тюрка и пере­мешивают в течение 2-3 мин. Получают разведение соответственно в 10 или 20 раз. Для разведения пробирочным методом в пробирку отмеривают 0,4 мл жидкости Тюрка и в нее вносят 0,02 мл крови, которую набирают капилляром Сали. Содержимое пробирки тщательно перемешивают.

Она заполняется так же, как и для подсчета эритроцитов. Через 1-2 минуты подсчитывают лейкоциты в 100 нерастянутых квадратах после того, как они осядут на дно камеры. Абсолютное количество клеток подсчитывается по формуле:

X = A.B/W.G, где

Х – количество лейкоцитов в 1 мкл крови;

А – количество лейкоцитов, подсчитанное в 100 больших квадратах;

Б – степень разведения крови (20);

В – количество маленьких квадратиков в 100 больших квадратах (1600);

Г – объем счетной камеры над маленьким (1/4000 мм3).

Другими словами, формула выглядит следующим образом: X = A*50. Например, подсчитано 180 лейкоцитов, тогда в абсолютных единицах получаем 9 000 клеток в 1 мкл крови. Чтобы перевести количество клеток в 1 литр (единицы системы СИ), результат нужно умножить на 106, то есть 9 000*106 = 9*109/л.

Автоматические счетчики могут подсчитывать лейкоциты точно так же, как и эритроциты.

В крови здоровых животных и птицы содержится следующее количество лейкоцитов: крупный рогатый скот – 4,5-12,0; овцы – 6,0-14,0; козы – 8,0-17,0; лошади – 7,0-12,0; свиньи – 8,0-16,0; собаки – 8,5-10,5; ку­ры – 20,0-40,0 на 10⁹/л.

Увеличение количества лейкоцитов в крови – лейкоцитоз – может быть физиологическим, медикаментозным и патологическим. Физиологичес­кий лейкоцитоз бывает при беременности, после физических нагрузок, после приема корма у плотоядных, при стрессе. Медикаментозный лейкоци­тоз наблюдается после парентерального введения животным белковых пре­паратов, вакцин, сывороток, алкалоидов и т.д.

Патологический лейкоцитоз наблюдается при гнойно-воспалительных процессах, сопровождающих ряд внутренних заболеваний: бронхопневмонию, пневмонию, плеврит, перикардит, ретикулоперитонит и др. Лейкоцитоз — яркий симптом, связанный с рядом инфекционных заболеваний, лейкозом, хирургическими инфекциями. Он также возникает при отравлении животных ртутью, мышьяком, передозировке камфары.

Снижение числа лейкоцитов – лейкцитопения – является результатом угнетения органов кроветворения, их истощения, пониженной реактивности организма. Лейкоцитопения развивается в результате инфекционных забо­леваний (классическая чума свиней, инфекционный энцефаломиелит лоша­дей, сальмонеллез, стахиботриотоксикоз и др.), радиационных поражений, передозировки препаратов (сульфаниламидов, левомецитина, синтомицина и др.). Выявление лейкоцитопении при заболеваниях, для которых характе­рен лейкоцитоз, указывает на сниженную естественную резистентность ор­ганизма и тяжелое течение болезни.

Кровяные пластинки (тромбоциты) играют ключевую роль в свертывании крови и защитной системе организма. Показаниями для подсчета тромбоцитов являются нарушения в системе свертывания крови, а также воздействие на животных ионизирующего излучения.

Существует несколько методов измерения количества тромбоцитов в крови:

1. подсчет в ячейке.

2. В автоматических счетчиках.

3. В мазке крови.

Подсчет в камере проводят по методу Хауке. Для этого 0,5 мл 1%-го раствора трилона Б смешивают с 0,5 мл крови (разведение 1:1). Затем в лейкоцитарный меланжер набирают кровь до метки “1”, а до метки “11” – 1%-й раствор аммония оксалата (получается разведение крови 1:20). Сме­ситель встряхивают и оставляют не менее чем на 20 мин для гемолиза эритроцитов. Счетную камеру заправляют общепринятым способом, подсчет тромбоцитов ведут через 5-7 мин в 5 больших квадратах, расположенных по диагонали, которые разделены на 16 маленьких квадратиков. Расчет проводят по формуле:

А*20

Х = ——— = А*1000/мкл = А*10⁹/л

80*1/4000

Для подсчета тромбоцитов в мазке крови (метод Фонио) требуется 1000 эритроцитов. Кровь для мазков берут из краевых вен уха. Предварительно на место инъекции наносят каплю 14% раствора сульфата магния, чтобы предотвратить слипание тромбоцитов. Мазки делаются путем смешивания выделенной капли крови с раствором, который затем окрашивается по Романовскому. Под микроскопом тромбоциты подсчитываются одновременно с эритроцитами. Зная абсолютное число эритроцитов, подсчитывают и тромбоциты. Например: при подсчете на 1000 эритроцитов обнаружено 60 тромбоцитов, количество эритроцитов 5,0*1012/л, следовательно, количество тромбоцитов 300*109/л.

В крови здоровых животных и птицы содержится следующее количество тромбоцитов: крупный рогатый скот – 260-700; лошади – 200-500; свиньи – 180-300; куры – 32-100 на 10⁹/л.

Уменьшение числа тромбоцитов – тромбоцитопения – выявляется при геморрагических диатезах. Данный симптом является ведущим геморраги­ческого синдрома.

Диатез (кровотечение) — это процесс, при котором организм склонен к постоянному кровотечению, либо спонтанному, либо в ответ на незначительные травмы. Помимо основного симптома заболевания (гемофилии), кровотечение может быть осложнением любого заболевания. Геморрагический диатез — это группа заболеваний и патологических состояний, вызванных нарушениями в работе коагуляционной (плазменной), тромбоцитарной и сосудистой систем организма.

Наследственный геморрагический диатез у животных встречается редко (или диагностируется), в основном у собак, свиней и лошадей. Существует множество различных патологических воздействий, которые могут вызвать дефекты в системе гемостаза: иммунные поражения сосудистой стенки и тромбоцитов, токсико-инфекционные поражения сосудов, заболевания печени и лекарственные воздействия. Приобретенные дефекты системы гемостаза исчезают после устранения основного заболевания. При всех геморрагических диатезах ведущим клиническим проявлением является геморрагический синдром, который охватывает все виды кровотечений.

Ведущие симптомы синдрома: кровоизлияния различного типа и размера в кожу, подкожную клетчатку, слизистые оболочки, ткани и полости тела; гематомы и кровотечения при мелких травмах и хирургических вмешательствах; тромбоцитопения; снижение свертываемости крови (удлинение времени кровотечения). Геморрагический диатез, вызванный недостатком аскорбиновой кислоты (скорбут, цинга), проявляется в виде кровоточивости десен, язв, расшатывания зубов и отеков.

Геморрагический синдром развивается при гемофилии, кровотечениях и лучевой болезни, острых токсических и хронических гепатитах, подпеченочной желтухе, авитаминозах А, С, К, Р, при ряде бактериальных и вирусных инфекций (сибирская язва, пастереллез, чума свиней и плотоядных и др.); при токсикозах и аллергических заболеваниях.

Тромбоцитоз, или повышение уровня тромбоцитов, встречается реже, он может возникнуть при пневмонии, плеврите, после операции или выздоровления от инфекционного заболевания.

Лекция № 6

Тема: СТУДЕНТЫ КРОВОСНАБЖЕНИЯ

План конференции

1. Морфология лейкоцитов у животных разных видов.

Лейкограмма крови и ее диагностическое значение.

3. Изучение видовой специфики лейкоцитоза и лейкопении.

3.1 Изменение эозинофилов и базофилов.

3.2 Нейтрофилы Нейтрофилы.

3.3 Повышение или снижение количества лимфоцитов и моноцитов.

Синдромы с нарушением лейкопоэза.

Морфология лейкоцитов крови у различных видов животных

Характеристики цитоплазмы и степень зернистости определяют тип лейкоцитов: гранулоциты (зернистые) — базофилы, эозинофилы и нейтрофилы — и агранулоциты (незернистые) — лимфоциты и моноциты.

Базофил имеет круглую или слегка овальную форму и от десяти до четырнадцати сантиметров в диаметре. Он имеет пурпурное пятно с бордовым или фиолетовым оттенком. Ядро полиморфное, плохо различимое, нечеткое и слабо очерченное. При отсутствии окрашивания мазка цитоплазма слабо окрашивается в розовый или бледно-фиолетовый цвет, поскольку из нее выделяются гранулы. Гранулы круглые или расплывчатые, окрашены в темно-фиолетовый, темно-синий или черный цвет и обычно разрушаются с образованием вакуолей.

Они имеют круглую форму, размером 10-25 мм в диаметре. Цитоплазма тускло-голубого цвета, заполненная круглыми или слегка овальными, розово-красными или ярко-красными грануляциями. Характер ядра зависит от степени зрелости клетки: у зрелых форм оно сегментированное, у молодых — округлое; окрашено в фиолетовый цвет. Когда ядро формируется у лошадей, крупного рогатого скота и свиней, оно обычно состоит из двух сегментов, а у овец, коз и собак — из трех. Самые крупные ядра у голубей, за ними следуют лошади. Цитоплазма зозинофилов у кошек содержит гранулы почти такой же плотности, как у эозинофилов, и часто имеет палочковидную форму. Когда гранулы растворяются, на их месте образуются вакуоли; в раздавленных клетках гранулы лежат свободно, «рассыпанные».

Его размер составляет 10-15 м. Нейтрофилы круглые. При дифференциации по степени зрелости различают миелоциты, ювенильные (метамиелоциты), колотые нейтрофилы и сегментоядерные нейтрофилы.

Миелоциты (М) характеризуются неравномерно окрашенным в фиолетовый цвет круглым или овальным ядром, часто расположенным эксцентрично. Цитоплазма голубоватая или розовая и содержит мелкие розовые грануляции. У здоровых животных они не обнаруживаются в крови.

Молодой нейтрофил имеет ядро бобовидной формы, неравномерно окрашенное в фиолетовый цвет (светлые участки перемежаются с темными). Цитоплазма розовая, иногда слабо окрашенная, с мелкой, нежно-розовой зернистостью. Периферическая кровь здоровых взрослых животных обычно не обнаруживает признаков этих паразитов.

Палочкоядерные нейтрофилы являются зрелыми нейтрофилами и постоянно присутствуют в крови здоровых животных. Они похожи на стержень, который может быть изогнут и напоминать подкову, дужку или латинскую букву S, на концах они перисто-выпуклые и могут быть окрашены неравномерно в темно-фиолетовый цвет. Часто в цитоплазме плохо видны мелкие розоватые грануляции.

Сегментоядерные нейтрофилы отличаются от палочкоядерных только характером ядра, которое состоит из 2-5 сегментов, между которыми имеются мостики; оно окрашивается в темно-фиолетовый цвет.

Лимфоциты можно разделить на три класса: малые (до 10 м), средние (10-14 м) и большие (15-25 м). Присутствует круглое ядро темно-фиолетового цвета. Цитоплазма слегка синего цвета, вокруг ядра имеется зона просветления (перинуклеарная зона); в малых лимфоцитах она может быть очень маленькой («голоядерные» лимфоциты); иногда цитоплазма содержит азурофильные зерна ярко-красного цвета. У здоровых животных в периферической крови преобладают малые лимфоциты, а средние и большие составляют менее 6%; в некоторых случаях они могут даже отсутствовать.

Это самая крупная из всех клеток периферической крови, имеющая округлую или неправильную форму (15-25 м). Ядро имеет разнообразную форму, включая подкову, бабочку, трилистник или бобовидную форму с выпуклостями, но оно также может быть сильно лопастным и крупносегментированным, а также обесцвеченным слабо-фиолетовым с более темными фиолетовыми пятнами («пятнистым»). Цитоплазма окрашена в светло-фиолетовый оттенок, а возле ядра видны пылевидные гранулы. Цитоплазма серо-дымчатая, серо-голубоватая, голубовато-серая, содержит мелкие грануляции.

Лейкограмма крови и её диагностическое значение

При микроскопии мазков крови, наряду с морфологической оценкой форменных элементов, проводят дифференцированный подсчет лейкоцитов или выводят лейкограмму. Лейкограмма – это процентное соотношение раз­личных видов лейкоцитов, записанное в определенном порядке. В клини­ческой ветеринарной диагностике общепринятым является следующая после­довательность записи лейкоцитов: Б, Э, Н (М, Ю, П, С), Л и Мн.

Техника микроскопии мазка крови и выделения лейкограммы будет более подробно рассмотрена в ЛПЗ. Здесь будут рассмотрены только следующие моменты. Можно получить один, три и четыре полевых мазка крови. Метод четырех полей признан наиболее точным и воспроизводимым.

Если в анализе крови нет аномальных изменений в количестве лейкоцитов, а также в морфологии или процентном соотношении лейкоцитов, то подсчет ограничивается 100. В противном случае необходимо подсчитать не менее 200 лейкоцитов. Лейкоциты регистрируются либо в сетке Егорова, либо с помощью 11-клавишного счетчика.

Лейкограмма в сочетании с клиническим осмотром животного и другими анализами крови имеет большое диагностическое и прогностическое значение. В то же время, однако, следует подчеркнуть, что лейкограмма дает информацию только о процентном соотношении между типами лейкоцитов, что не является полезным для определения их абсолютного количества в крови.

Увеличение процентного содержания клеток одного вида в лейкограмме снижает процентное содержание других видов лейкоцитов, хотя их абсолютное количество может быть в пределах нормы. Поэтому, используя как общее количество лейкоцитов крови, так и процентное содержание каждого вида в лейкограмме, абсолютное количество клеток каждого вида рассчитывается следующим образом:

Л(109/л) = Л(%)хА(109/л):100,

Он получил название лейкоцитарного профиля, исходя из выражения лейкограммы в абсолютных единицах.

При морфологической оценке клеток крови и лейкограммы у животных с различной патологией можно выявить следующие изменения:

1) увеличение или уменьшение процентного или абсолютного количества определенных типов лейкоцитов (виды лейкоцитоз и лейкопения);

2) появление молодых и незрелых форм клеток;

Ядро и цитоплазма лейкоцитов показывают патологические изменения.

3. Видоспецифический лейкоцитоз и лейкопения и их клиническая оценка

Увеличение или уменьшение отдельных видов лейкоцитов может быть относительным или абсолютным. Помимо процентного увеличения или уменьшения определенного вида лейкоцитов, существует также количественное изменение их числа. Тогда говорят об абсолютном видовом лейкоцитозе или лейкопении. Относительное нарушение определяется как такое, при котором изменяются только некоторые виды лейкоцитов.

Попадание незрелых форм лейкоцитов в периферическую кровь возможно при ряде заболеваний. В отличие от незрелых форм, молодые клетки часто имеют большую длину и неправильную форму. Чем моложе клетка, тем больше размер ядра и ядерно-цитоплазматическое соотношение. Ядра молодых клеток круглые, мягкие и гладкие (у зрелых клеток ядра компактные). В молодом возрасте ядро клетки менее сегментировано.

В зрелой клетке отсутствуют нуклеолы, а бластные формы имеют округлые ядра светло-сливового цвета. Если в ядре имеются очень крупные нуклеолы (ядрышки), превышающие одну треть диаметра ядра, клетка считается патологической.

3.1 Изменения в содержании эозинофилов и базофилов

Эозинофилия крови — это увеличение количества Е. Поражаются пациенты в основном паразитарными заболеваниями (фасциолез, эймериоз, аскаридоз, трихинеллез, поражения кожи, в том числе грибковые, и т.д.). Наряду с аллергическими состояниями у людей, эозинофилия также часто встречается при заболеваниях животных, например, при хронической альвеолярной эмфиземе у лошадей. E может достигать 45% при ржавчине свиней и 60% при эозинофильном миозите собак. Эозинофилия появляется при переходе острого процесса в хронический, кетозе, суставном ревматизме, заболеваниях печени, иногда после применения антибиотиков, введения сыворотки.

Состояние вызывают анемия, острые инфекционные и протозойные заболевания, эозинопения и т.д. Если эозинопения сопровождается ядерным сдвигом нейтрофилов, это свидетельствует о прогрессировании процесса. Если после исчезновения Е (анэозинофилии) при интоксикации или инфекционном заболевании наблюдается увеличение их числа, это свидетельствует о начале периода выздоровления и является благоприятным симптомом.

Базифилия у животных встречается относительно редко. Обычно это состояние наблюдается при миелоидной лейкемии, аллергии, диабете, гипотиреозе, а также после парентерального введения сывороток. Часто гельминтозы сопровождаются базофилией, а также эозинофилией.

Диагноз базопении в ветеринарии еще не установлен, но существует теория, что количество В снижается по мере увеличения А.

3.2 Нейтропены и нейтрофилы

Наиболее распространенные изменения в лейкограмме животных с этим заболеванием происходят среди нейтрофилов в сторону увеличения незрелых типов клеток (ядерный сдвиг слева) или увеличения сегментированных Н-клеток с одновременным уменьшением палочковидных Н-клеток (ядерный сдвиг справа). Индекс ядерного сдвига нейтрофилов рассчитывается следующим образом:

ИС=(М Ю П)/С.

I S является полезным инструментом диагностики нейтрофилии (нейтрофилез, нейтрофильный лейкоцитоз), которая встречается наиболее часто и условно классифицируется на четыре категории:

(1) нейтрофилия, связанная со смещением ядра влево, вызванная простыми регенеративными (гипорегенеративными) изменениями. При хронических скрытых инфекциях (туберкулез и др.) она характеризуется увеличением Р на 10-13% при нормальном или слегка сниженном содержании С. В качестве примера могут быть диагностированы легкие острые инфекции, протозойные заболевания, гнойные местные процессы (гнойные раны, артриты, умеренные тендовагиниты и др. ).

2) Нейтрофия с регенеративным сдвигом ядра характеризуется увеличением Р, а также одновременным появлением Ю. Лейкоцитоз в этом случае умеренный. Это происходит при острых инфекционных заболеваниях, эндокардите, септических процессах, а у лошадей — после длительной напряженной работы.

3. Резкий гиперрегенераторный сдвиг ядра характеризуется увеличением количества Р, Ю и появлением М. Этот сдвиг свидетельствует о резком раздражении кроветворной системы. Если наблюдается также лейкопения, то это проявление дисфункции костного мозга, негативное проявление.

Такой сдвиг в картине крови наблюдается при тяжелом течении инфекционных и протозойных заболеваний, септических процессах, острых желудочно-кишечных заболеваниях у молодых животных, начальной стадии миелолейкоза, отравлениях солями ртути и свинца, лизолом и др.

4) нейтрофилия с гипопластическим (дегенеративным) сдвигом ядра Н вправо характеризуется увеличением содержания С без увеличения процента незрелых клеток. При этом появляются измененные формы лейкоцитов, которые заключаются в появлении гиперсегментации ядра (до 20 и более сегментов), ядро может быть представлено отдельными округлыми частями без связи между собой, в цитоплазме появляются вакуоли, изменяется размер клеток (чаще увеличивается). Вакуолизация не только цитоплазмы, но и ядра свидетельствует о тяжелом течении патологического процесса. Когда в цитоплазме появляются патологические гранулы (токсическая зернистость), это связано с интоксикацией. Чем сильнее интоксикация, тем сильнее гранулы.

Такой сдвиг в крови отмечается при тяжелых инфекционных и неинфекционных заболеваниях с выраженной интоксикацией организма, отравлениях, болезнях кроветворных органов, лучевой болезни.

Анемия относится к аномально низкому уровню нейтрофилов. В дополнение к снижению количества лейкоцитов, некоторые ядра нейтрофилов имеют гипопластические сдвиги. Нейтропения указывает на угнетение и истощение функции рогового кроветворения костного мозга в результате алиментарной дистрофии, инфекционных заболеваний, после радиационных поражений.

Переход от нейтропении к нейтрофилии и от лейкопении к лейкоцитозу указывает на осложнение (пневмония, плеврит, перикардит и т.д.). Нейтропения может возникать при приеме антибиотиков, сульфаниламидов и преднизолоновых препаратов.